M）通过蛋白质印迹测试P-mTOR的表达，并显示三个独立实验的统计分析。（N-P）通过蛋白质印迹检测P-mTOR和P-p70S6K的表达，并显示三个独立实验的统计学分析。

5. MSCIPFP-exos中的miR-100-5p介导mTOR的下调表达

图5. （A）生物信息学分析预测mTOR和miR-100-5p之间的潜在结合序列。（B）miRNA在总miRNA读数中的相对比例。（C）表示mTOR mRNA的3'UTR中mir-100-5p的预测结合位点和突变型mTOR 3'UTR（mTOR 3'UTR-mu）的示意图。（D）使用双荧光素酶报告系统测定荧光素酶活性。（E）软骨细胞用软骨细胞MSCIPFP -Exos 培养24h，然后通过qRT-PCR检测mir-100-5p的相对表达。（F）通过蛋白质印迹检查P-mTOR的蛋白质水平。

6. 关节内注射antagomir-100-5p可破坏MSCIPFP-Exos对DMM模型中受损软骨的治疗作用

图6（A）显示关节内注射时间的流程图。（B）小鼠膝关节的染色。（C）DMM小鼠膝关节的OARSI评分。（D）和（E）膝关节胫骨平台切片中胶原蛋白II和MMP13的免疫组织化学分析。

7.在DMM模型中Antagomir-100-5p部分逆转MSCIPFP-Exos调节的mTOR信号。

图7. （A）和（B）膝关节胫骨平台切片中P62，LC3B和mTOR的免疫组织化学分析。（C）软骨保护中MSCIPFP -Exos的潜在机制。

结果总结

本研究表明，MSCIPFP外泌体可以通过抑制软骨细胞凋亡，平衡合成代谢和分解代谢过程来保护软骨免受损伤，并改善DMM诱导的OA小鼠的步态模式。 该机制可能与miR100-5p介导的mTOR-自噬途径的抑制有关。 由于临床关节镜手术从OA患者获取人IPFP相对方便可行，我们的研究结果可能为使用MSCIPFP -Exos治疗骨性关节炎提供新的潜在治疗策略。