产品介绍：

       阿尔茨海默病是老年人最常见的病状。阿尔茨海默氏病的研究集中在鉴定与易感性有关的基因以及可能对诊断和治疗有用的标志物。阿尔茨海默氏症的标志性特征是患者脑组织中淀粉样斑块的相关性，因此研究的重点是了解与淀粉样蛋白生物学相关的分子途径，以更好地了解这种疾病的病理学。Aß和过度磷酸化的tau以导致突触丧失的方式影响神经传递，轴突运输，信号级联，细胞器功能和免疫反应。除了与APP加工相关的基因外，下游途径还包括凋亡，线粒体，钙信号传导和可能与阿尔茨海默氏病生物学有关的细胞周期相关分子。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Alzheimer’s Disease PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0005-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

A2m

Apbb1

Bace1

Casp3

Ctsc

Gnaz

Gng4

Hsd17b10

Lrp8

Plau

Prkcq

Uqcrc1

B

Abca1

Apbb2

Bace2

Casp4

Ctsd

Gnb1

Gng5

Ide

Map2

Plg

Prkcz

Uqcrc2

C

Abcb1a

Aph1a

Bche

Cdk1

Ctsg

Gnb2

Gng7

Igf2

Mapt

Prkca

Psen1

Gsk3b

D

Ache

Aplp1

Bdnf

Cdk5

Ctsl

Gnb4

Gng8

Il1a

Mpo

Prkcb

Psen2

Lrp6

E

Adam17

Aplp2

Capn1

Cdkl1

Ep300

Gnb5

Gngt1

Insr

Nae1

Prkcd

Serpina3c

Plat

F

Adam9

Apoa1

Capn2

Chat

Ern1

Gng10

Gngt2

Lpl

Ncstn

Prkce

Snca

Prkci

G

Apba1

Apoe

Capn3

Clu

Gap43

Gng11

Gsk3a

Lrp1

Pkp4

Prkcg

Sncb

Ubqln1

H

Apba3

App

Capn5

Ctsb

Gnao1

Gng3

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Mouse）		相关基因
β-淀粉样蛋白的产生，低聚，清除和降解	分泌酶	Adam9,Aph1a,Bace1,Bace2,Ctsb,Ncstn,Psen1,Psen2
	其他肽酶	Ide,Plat,Plau ,Plg
	内吞作用	Aplp1,App,Lrp1,Lrp6,Lrp8
	其他β淀粉样代谢基因	A2m,Ache,Apbb1,Apbb2,Apoe,Bche,Ubqln1
细胞骨架调节剂		Apoe,Map2,Mapt,Pkp4,Prkci.
突触传递		Apba1,Apoe,Chat
其他突触功能		Ache,Apba1,Apbb1,Apbb2,Apoe,Bdnf
胆固醇代谢		Abca1,Apoa1,Apoe,Lrp8
脂质和脂蛋白代谢		Apoa1,Apoe,Clu,Hsd17b10,Igf2,Lpl,Lrp1,Lrp8,Sncb.
激素和激素处理		Bace2,Igf2
诱导细胞凋亡		Apoe,Casp3,Casp4,Ern1,Prkca,Prkce
抗凋亡		Il1a,Mpo,Prkcz,Psen1,Snca
其他凋亡基因		Aplp1,App,Clu,Ep300,Mapt,Nae1,Psen2
细胞周期		Apbb1,Apbb2,Ern1
其他细胞周期基因		Apbb1,Apbb2,Cdk1,Cdk5,Cdkl1,Ep300,Il1a,Nae1,Prkca
蛋白激酶类		Cdk1 ,Cdk5,Cdkl1,Ern1,Gsk3a,Gsk3b,Insr,Prkca,Prkcb,Prkcd,Prkce,Prkcg,Prkci,Prkcq,Prkcz
细胞信号分子		Gsk3b,Lrp6Notch信号Aph1a,Ncstn,Psen1,Psen2
G蛋白偶联受体信号		Aplp2,Gnao1,Gnaz,Gnb1,Gnb2,Gnb4,Gnb5,Gng10,Gng11,Gng3,Gng4,Gng5,Gng7,Gng8,Gngt1,Gngt2.
细胞内信号		Apba3,Apbb2,Prkca,Prkcb,Prkcd,Prkce,Prkcg,Prkci,Prkcq,Prkcz,Psen1,Psen2
其他细胞信号		Gap43,Gnb2,Ide,Il1a,Insr,Nae1,Plau
转录调控		Apbb1,Apbb2,Ep300,Ern1
氧化还原酶和氧化应激		Hsd17b10,Mpo,Uqcrc1,Uqcrc2
蛋白酵素		Ctsc,Ctsd,Ctsg,Ctsl,Uqcrc2
蛋白酶抑制因子		Aplp2,App,Serpina3c

阿尔兹海默症通路图

 

 

图片来源于：https://www.wikipathways.org/index.php/Pathway:WP5124#nogo2

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.