产品介绍

路径描述

      为了启动对传染源的特异性免疫反应，免疫系统必须能够穿过与病原体入侵相关的分子海洋，并分离出特定的蛋白质产物，从而加强宿主的防御。这种对抗模型隐含的是免疫原性肽表位的处理（抗原处理）及其在一组细胞表面的呈递，称为APC（抗原呈递细胞）（抗原呈递）。这些作用的结果是诱导T细胞反应，招募并参与免疫反应的其他分子参与者。抗原处理和呈递是指细胞内发生的过程，这些过程导致蛋白质的裂解（蛋白水解）、片段与MHC（主要组织相容性复合体）分子的结合以及肽MHC分子在细胞表面的表达，在细胞表面它们可以被T细胞上的TCR（T细胞受体）识别。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Antigen Processing and Presentation PCR ARRAY plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0270-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ADRM1

CD4

CTSL1

HLA-DOA

HSP90AB1

ICAM1

IFNA21

KLRC1

NFYA

PSMD11

SLC10A2

tnf-a

B

CALR

CD74

CTSS

HLA-DQA1

HSPA1A

IFNA1

IFNA4

KLRC2

PDIA2

PSMD4

TAP1

clip

C

CANX

CD8A

ERAP1

HLA-DQB1

HSPA1B

IFNA10

IFNA5

KLRD1

PSMB8

PSMD6

TAP2

KIR2DL4

D

CD1A

CD8B

ERAP2

HLA-DRA

HSPA1L

IFNA13

IFNA6

LGMN

PSMC2

PSME1

TAPBP

MR1

E

CD1B

CIITA

FCGRT

HLA-DRB1

HSPA2

IFNA14

IFNA7

LTA

PSMC3

PSME2

TAPBPL

PSMD1

F

CD1C

CLEC4M

HLA-A

HLA-DRB3

HSPA5

IFNA16

IFNA8

MICA

PSMC4

PSME3

THBS1

SHFM1

G

CD1D

CREB1

HLA-B

HLA-E

HSPA6

IFNA17

IFNG

MICB

PSMC5

RELB

UBR1

ULBP1

H

CD209

CTSB

HLA-C

HLA-G

HSPA8

IFNA2

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.