产品介绍：

三种不同的模式识别受体家族（PRR）（toll样（TLR），Nod样（NLR）和RIG-I样受体）启动先天免疫，即先天性一般宿主对常见病原体如病毒的反应。这些受体识别并结合病毒DNA和RNA，激活下游信号传导以诱导炎性细胞因子（包括α和β干扰素）的表达。α和β干扰素介导激活树突细胞和自然杀伤细胞以及适应性免疫应答的I型干扰素信号传导。一些病毒核酸与多个PRR结合，并且每种免疫细胞类型表达一组特定的PRR。该阵列包含TLR，NLR和RIG-I样受体的受体和信号传导效应子，对这些途径有反应的基因，以及参与I型干扰素信号传导的基因以及下游干扰素刺激基因（ISG）。

WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Antiviral Response PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0014-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Atg12

Cd40

Cxcl10

Fadd

IFNAR2

Il6

Lgmn

Mapk14

Nfkbia

Pycard

Tbk1

Traf6

B

Azi2

Cd80

Cxcl11

Fos

Ifnb1

Irak1

Map2k1

Mapk3

Nfkbia

Rela

Tbkbp1

Trim25

C

Card9

Cd86

Cxcl9

Hsp90aa1

Ikbkb

Irak4

Map2k3

Mapk8

Nlrp3

Ripk1

Tlr3

Mapk10

D

Casp1

Chuk

Cyld

IFNA1

Il12a

Irf3

Map2k4

Mavs

Nod2

Stat1

Tlr7

Nfkb1

E

Casp8

Cnpy3

Dak

Ifna2

Il12b

Irf5

Map3k1

Mefv

OAS1

STAT2

Tlr9

Pstpip1

F

Ccl3

Ctsb

Ddx3x

IFNA4

Il15

Irf7

Map3k7

Mx1

Oas2

Sugt1

Tnf

Tank

G

Ccl4

Ctsl1

Ddx58

IFNA5

Il18

Isg15

Mapk1

Myd88

Pin1

Tab2

Tradd

Traf3

H

Ccl5

Ctss

Dhx58

Ifnar1

Il1b

Jun

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）		相关基因
Toll样受体（TLR）信号	Toll样受体和分子伴侣	Cnpy3,Ctsb,Ctsl,Ctss,Lgmn,Tlr3,Tlr7,Tlr9
	Toll样受体下游的信号传导	Chuk ,Fos,Ikbkb,Irak1,Irak4,Irf3,Irf5,Irf7,Jun,Map2k1,Map2k3,Map2k4 ,Map3k7,Mapk1,Mapk10,Mapk14 ,Mapk3,Mapk8,Myd88,Nfkb1,Nfkbia,Rela,Ripk1,Tab2,Tbk1,Tnf,Traf3,Traf6
	Toll样受体信号传导反应基因	Ccl3,Ccl4 ,Ccl5,Cd40,Cd80,Cd86,Cxcl10,Cxcl11,Cxcl9,Ifna2,Ifnb1,Il12a,Il12b,Il15,Il1b,Il6
NOD样受体（NLR）信号	NOD-Like 受体和信号分子	Card9,Casp1,Hsp90aa1,Mapk10,Mefv,Nlrp3,Nod2,Oas2,Pstpip1,Pycard,Sugt1,Tank,Tbkbp1
	NOD样受体信号传导反应基因	Il18,Il1b
RIG-I样受体信号转导	受体和伴侣	Cyld,Ddx58,Dhx58,Isg15,Dak.
	RIG-I-Like 受体和伴侣	Atg12,Azi2,Casp8,Chuk,Ddx3x,Fadd,Ikbkb,Irf3,Irf7,Map3k1,Map3k7,Mapk14,Mapk8,Mavs,Nfkb1,Nfkbia,Pin1,Rela,Ripk1,Tbk1,Tnf,Tradd,Traf3,Traf6
	RIG-I样受体下游的信号传导	Cxcl10 ,Ifna2,Ifnb1,Il12a
I型干扰素信号和应答	I型干扰素信号	Ifna2,Ifnar1,Ifnb1,Stat1
	干扰素应答基因	Il15,Isg15,Mx1,Tlr3

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.