产品介绍：

       癌症研究人员一直在努力解决令人烦恼的问题，尽管许多抗癌药物大大减少了肿瘤的大小，但大多数癌症最终都会复发。治疗期间癌细胞群的动态变化表明，对当前疗法具有抗性的少量细胞最终导致肿瘤的再生长。此外，研究表明，这些细胞可为突变细胞的产生和繁殖提供储库，从而进一步抵抗治疗。癌症干细胞假说假定肿瘤内只有非常罕见的细胞群具有无限自我更新的能力。这个概念具有重要的治疗意义，并且可以解释为什么许多癌症即使在治疗去除任何可检测的肿瘤细胞后也会返回。如果目前的治疗不能消除癌症干细胞，那么一旦治疗停止，它们可能会再生肿瘤。最近，技术的进步已经允许从各种不同类型的癌症中前瞻性鉴定和纯化CSC用于进一步表征。用该阵列分析的基因包括CSC分子标记和调节CSC增殖，自我更新和多能性的基因，以帮助确保CSC分离株在培养物中的稳定性。还包括参与CSC不对称细胞分裂，迁移和转移的基因，以及相关的信号转导途径，以帮助促进CSC表征以及目前正在测试的治疗剂的靶标

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Cancer Stem Cells PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0023-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ABCB5

BMP7

CHEK1

ENG

FZD7

ITGA4

KLF4

MYC

PLAT

SAV1

THY1

ZEB1

B

ABCG2

CCNA2

DACH1

EPCAM

GATA3

ITGA6

LATS1

MYCN

PLAUR

SIRT1

TPX2

ZEB2

C

ALCAM

CCNB2

DDR1

ERBB2

GSK3B

ITGB1

LIN28A

NANOG

POU5F1

SMO

TWIST1

MUC1

D

ALDH1A1

CD24

DKK1

ETFA

HDAC1

JAG1

LIN28B

NFKB1

PROM1

SNAI1

TWIST2

PECAM1

E

ATM

CD34

DLL1

FGFR2

ID1

JAK2

MAML1

NOS2

PTCH1

SOX2

WEE1

RAD54L

F

ATXN1

CD38

DLL4

FLOT2

IKBKB

KIT

MERTK

NOTCH1

PTPRC

STAT3

WNT1

TGFBR1

G

AXL

CD44

DNMT1

FOXA2

IL8

KITLG

MS4A1

NOTCH2

RAC1

TAZ

WWC1

YAP1

H

BMI1

CDC20

EGF

FOXP1

ITGA2

KLF17

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

 

基因分类（Human）	相关基因
癌症干细胞标记	ABCB5,ALCAM,ALDH1A1,ATXN1,BMI1,CD24,CD34,CD38,CD44,ENG,ETFA,FLOT2,GATA3,ITGA2,ITGA4,ITGA6,ITGB1,KIT,MS4A1,MUC1,PECAM1,PROM1,PTPRC,THY1.
细胞增殖	KITLG,LIN28B,NOS2
自我更新	BMP7,DNMT1,FGFR2.
多能性	KLF4,LIN28A,MYC,NANOG,POU5F1,SOX2
不对称分裂	FOXP1,HDAC1,MYCN,SIRT1,WNT1
细胞迁移和转移	AXL,CXCL8 ,ID1,KLF17,PLAT ,PLAUR,SNAI1 ,TWIST1,TWIST2,ZEB1,ZEB2
干性丧失	ALDH1A1 ,CD34,DACH1,FOXA2,PECAM1,PTCH1
信号转导	Hippo 信号LATS1,MERTK,SAV1,TAZ,WWC1,YAP1Hedgehog 信号PTCH1,SMONotch 信号DLL1,DLL4,JAG1,MAML1,NOTCH1,NOTCH2WNT 信号 DKK1,EPCAM,FZD7,WNT1AKT＆PI3激酶/mTOR信号传导ABCG2 ,GSK3B.NFKB信号 IKBKB,JAK2,NFKB1
癌症治疗靶点	ABCG2,ATM,AXL,CHEK1,DDR1,DKK1,EPCAM,FZD7,GSK3B,ID1,IKBKB,JAK2,KLF17,NFKB1,PTCH1,SMO,STAT3,TGFBR1,WEE1

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.