产品介绍：

由于心血管安全问题，过去40年中近10%的药物已从全球临床市场撤出，这一事实使心脏成为毒理学研究的重要目标。鉴定心脏毒性药物和其他化合物是困难的，因为心脏反应背后的作用机制仍不清楚。然而，使用总体形态变化作为表型通常需要昂贵且耗时的慢性研究。在其他测量的毒性反应之前急性暴露时发生可量化的基因表达变化，并且它们的分析增强了该领域对这些效应的理解。该阵列包括来自在许多模型系统中使用各种药物和化学品的引用研究的心脏损伤的潜在生物标志物。通过分析这些基因的表达，减少实验时间和成本，可以在验证过程的早期从管道中识别和消除心脏毒性候选药物。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Cardiotoxicity PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0022-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Abhd2

Abra

Acta1

Adra2a

Aifm1

Ak3

Ash1l

Atp5j

Bcat1

Bgn

Bpifa1

Bsn（bassoon）

B

Btg2

Ccl7

Ccr1

Cd14

Cfd

Ch25h

Ckm

Col15a1

Col3a1

Crem

Csnk2a2

Dusp8

C

Egr1

Erk（Mapk1）

Fcgr2b

Fhl1

Fosl1

Gja1

Gpm6a

Hamp

Hspa2

Hsph1

Ift20

Igfbp5

D

Il6

Itpr2

Kcnj12

Klhl40

Klhl41

Mcm6

Mek（Mdk）

Mt1

Nexn

Nfib

Pdcd1

Pdk4

E

Pkn2

Pla2g4a

Plau

Pln

Postn

Ppbp

Ppp1r14c

Prkab2

Psma2

Psmd7

Pum2

Pvr

F

Raf

Rbm3

Reg3b

Rnd1

Rps6kb1

S1pr2

Serpine1

Shp2（Ptpn11）

Sik1

Slc4a3

Sox4

Spp1

G

Tcf4

Tgfb2

Thrap3

Tiam1

Timp1

Tnf

Tubb6

Txnip

Uba5

Ubxn2a

Uck2

Ucp1

H

Vcan

Vegfa

Vim

Wipi1

Zfp148

Zfp612

Actb

Gapdh

Hprt1

B2m

NTC

NTC

基因分类（Mouse）		相关基因
心脏毒性上调	肌肉收缩	Klhl41.
	血管生成	Il6,Plau ,Serpine1,Tgfb2.
	信号转导	Abra,Adra2a,Ccr1,Crem,Il6,Rnd1,Sik1,Tgfb2,Tiam1.
	细胞周期	Bcat1,Fosl1,Hspa2,Sik1,Tgfb2
	心肌细胞发育	Btg2,Crem,Egr1,Fhl1,Hspa2,Il6,Rnd1,Sik1,Spp1,Tgfb2,Tiam1,Timp1,Ucp1,Vcan.
	代谢（调节和机制）	Abra,Adra2a,Btg2,Ch25h,Crem,Egr1,Fosl1,Il6,Pdk4,Pla2g4a,Pum2,Rbm3,Sik1,Tcf4,Tgfb2,Timp1
	细胞迁移和运动	Abhd2,Ccl7,Ccr1,Fosl1,Il6,Plau,Ppbp,Pvr,Tgfb2
	其他基因在心脏毒性中上调	Bpifa1,Cd14,Cfd,Ckm,Fcgr2b,Gpm6a,Hamp,Klhl40,Mt1,Reg3b,Tubb6,Uck2
心脏毒性下调	肌肉收缩	Acta1,Gja1,Kcnj12,Rps6kb1.
	血管生成	Col15a1,Postn,Vegfa
	信号转导	Aifm1,Dusp8,Gja1,Igfbp5,Itpr2,Rps6kb1,S1pr2,Thrap3
	细胞周期	Csnk2a2,Mcm6,Psma2,Psmd7,Txnip
	心肌细胞发育	Acta1,Col15a1,Col3a1,Gja1,Igfbp5,Pln,Rps6kb1,Sox4,Txnip.
	代谢（调节和机制）	Ash1l,Atp5j,Dusp8,Igfbp5,Mcm6,Nfib,Ppp1r14c,Prkab2,S1pr2,Sox4,Thrap3,Txnip,Zfp148,Zfp612
	细胞迁移和运动	Igfbp5,Nexn,Rps6kb1
	其他基因在心脏毒性中下调	Ak3,Bgn,Bsn,Hsph1,Ift20,Pkn2,Slc4a3,Uba5,Ubxn2a,Vim,Wipi1

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.