产品介绍：

      有丝分裂细胞周期的进展是通过一个可复制的事件序列完成的，DNA复制（S期）和有丝分裂（M期）被称为G1期和G2期的间隙暂时分离。细胞周期蛋白依赖激酶（CDK）是关键的调节酶，每个酶由催化CDK亚单位和激活细胞周期蛋白亚单位组成。CDK通过调节关键底物的活性来调节细胞在细胞周期各个阶段的进展。CDKs的下游靶点包括转录因子E2F及其调节因子Rb。为了使细胞有序分裂，需要在细胞周期的特定点精确激活和失活CDK。细胞周期蛋白CDK抑制剂（CKIs），如p16Ink4a、p15Ink4b、p27Kip1和p21Cip1，参与CDK活性的负调控，从而提供了一条负调控细胞周期的途径。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Cell Cycle PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0163-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Abl1

Atm

Atr

Aurka

Aurkb

Bcl2

Birc5

Brca1

Brca2

Casp3

Ccna1

Ccna2

B

Ccnb1

Ccnb2

Ccnc

Ccnd1

Ccnd2

Ccnd3

Ccne1

Ccne2

Ccnf

Cdc20

Cdc25a

Cdc25b

C

Cdc25c

Cdc34

Cdc6

Cdc7

Cdk1

Cdk2

Cdk4

Cdk5

Cdk5r1

Cdk5rap1

Cdk6

Cdk7

D

Cdkn1a

Cdkn1b

Cdkn2a

Cdkn2b

Cdkn3

Chek1

Chek2

Ddit3

Dst

E2f1

E2f3

E2f4

E

Gadd45a

Gpr132

Hus1

Inha

Itgb1

Mad2l1

Mcm2

Mcm3

Mcm4

Mdm2

Mki67

Mre11

F

Msh2

Nbn

Nek2

Notch2

Pkd1

Pmp22

Ppm1d

Rad17

Rad21

Rad51

Rad9a

Ran

G

Rb1

Rbl1

Rbl2

Sesn2

Sfn

Shc1

Skp2

Slfn1

Smc1a

Stag1

Stmn1

Terf1

H

Tfdp1

Tfdp2

Tp53

Tp63

Tsg101

Wee1

Actb

Gapdh

Hprt1

Ubb

NTC

NTC

  

基因分类（Rat）	相关基因
G1阶段和G1/S过渡	Cdk6，Cdkn3，Gpr132，Itgb1，Skp2，Slfn1
S期和DNA复制	Cdc6，Cdc7，Mcm2，Mcm3，Mcm4，Mki67，Mre11a，Msh2，Rad17，Rad51。
G2阶段和G2/M过渡	Birc5，Cdkn3，Chek1，Ppm1d
M阶段	Aurkb，Brca2，Ccna1，Ccnb1，Cdc20，Cdc25a，Cdc25b，Cdc25c，Cdc6，Cdk1，Cdk2，Nek2，Rad21，Ran，Shc1，Smc1a，Stag1，Stmn1，Terf1，Wee1
细胞周期检查点和细胞周期停滞	Casp3，Cdc25c，Cdk1，Cdk5rap1，Cdkn1a，Cdkn1b，Cdkn2a，Cdkn2b，Cdkn2b，Cdkn3，Chek1，Chek2，Ddit3，Dst，Gadd45a，Hus1，Inha，Mad2l1，Mdm2，Msh2，Nbn，Nbn，Notch2，Pkd1，Pkd1，Pmp22，Ppm1d，Rad9，Rb1，Cdkn1b，Cdkn1a，Cdkn2a，Slfn1，Smc1a，Tsg101
细胞周期的调节	Abl1，Aurka，Bcl2，Brca2，Ccna1，Ccna2，Ccnb1，Ccnb2，Ccnc，Ccnd1，Ccnd2，Ccnd3，Ccne1，Ccnf，Cdc20，Cdc25c，Cdc6，Cdk1，Cdk4，Cdk6，Cdkn1a，E2f1，E2f3，E2f4，Gadd45a，Itgb1，Rad9，Ran，Rb1，Sfn，Shc1，Skp2，Tfdp2
细胞周期的负调控	Atm，Brca1，Casp3，Cdkn2a，Inha，Rbl1，Rbl2，Tp53，Tp63

细胞周期通路图：

 

图片来源于：https://www.wikipathways.org/index.php/Pathway:WP179#nogo2

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.