产品介绍：

      细胞连接是胞质膜局部区域特化形成的，通过膜蛋白、细胞骨架蛋白或者胞外基质形成的细胞与细胞之间、细胞与胞外基质之间的连接结构。细胞连接包括紧密连接、通讯连接、锚定连接。每个连接方式都发挥着特定的作用，紧密连接通过跨膜蛋白相连将相邻的上皮细胞封闭起来，防止可溶性物质的反渗，保证机体内环境的相对稳定。在相互接触的细胞之间建立连通讯接，允许无机离子、第二信使及水溶性小分子量的代谢物质从中通过，从而沟通细胞达到代谢与功能的统一。锚定连接通过连接肌动蛋白（粘着带，粘着斑）或通过中间纤维（桥粒，半桥粒）将细胞或细胞基质相连成一个有序的细胞群体，使细胞间、细胞与基质间具有抵抗机械张力的牢固粘合。

      细胞间连接的主要作用于加强细胞间的机械连接，及对细胞间的物质交换起到重要作用。本产品包含了90个关键细胞连接信号通路基因，包括主要的黏连分子，桥粒，半桥粒，紧密连接，间隙连接和粘附连接相关基因。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品名：	Cell Junction PathwayFinder PCR Array plate
种属：	Rat
货号：	WC-MRNA0026-R
规格：	96孔板
品牌：	WCGENE ® biotech
产品：	96孔引物预制板，封板膜，说明书
储存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Cav1

Cldn1

Cldn18

Cldn8

Dsg4

Gja5

Gjc2

Itga4

Itgax

Jup

Notch4

Tjp2

B

Cav2

Cldn10

Cldn19

Cldn9

Dsp

Gja8

Gjc3

Itga5

Itgb1

Myl12a

Ocln

Tjp3

C

Cav3

Cldn11

Cldn2

Dll1

Dst

Gjb1

Gjd2

Itga6

Itgb2

Myl12b

Pecam1

Itga3

D

Cdh1

Cldn12

Cldn3

Dsc1

Esam

Gjb2

Icam1

Itga7

Itgb3

Myl6b

Plec

Itgav

E

Cdh2

Cldn14

Cldn4

Dsc2

F11r

Gjb3

Icam2

Itga8

Itgb4

Myl9

Pvrl1

Jam3

F

Cdh5

Cldn15

Cldn5

Dsc3

Gja1

Gjb4

Itga1

Itgal

Itgb5

Notch1

Pvrl2

Notch3

G

Cdx1

Cldn16

Cldn6

Dsg1

Gja3

Gjb5

Itga2

Itgam

Itgb6

Notch2

Pvrl3

Tjp1

H

Cdx2

Cldn17

Cldn7

Dsg3

Gja4

Gjb6

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关基因
黏着斑	Cav1,Cav2,Cav3,Itga1,Itga2,Itga3,Itga4 ,Itga5,Itga6,Itga7,Itga8,Itgal,Itgam,Itgav,Itgax,Itgb1,Itgb2,Itgb3,Itgb4,Itgb5,Itgb6.
紧密连接	Cldn1,Cldn10,Cldn11,Cldn12,Cldn14,Cldn15,Cldn16,Cldn17,Cldn18,Cldn19,Cldn2,Cldn3,Cldn4,Cldn5,Cldn6,Cldn7,Cldn8,Cldn9, Esam,F11r,Icam1,Icam2,Jam3,Ocln,Pecam1,Tjp1,Tjp2,Tjp3.
间隙连接	Gja1 ,Gja3,Gja4,Gja5,Gja8,Gjb1 ,Gjb2 ,Gjb3,Gjb4,Gjb5,Gjb6,Gjc2,Gjc3,Gjd2.
黏着连接	Cdh1 ,Cdh2 ,Cdh5,Dll1 ,Nectin1,Nectin2,Nectin3,Nectin4,Notch1,Notch2,Notch3,Notch4.
桥粒	Dsc1,Dsc2,Dsc3,Dsg1,Dsg3,Dsg4,Dsp,Jup.
半桥粒	Dst,Plec.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.