产品内容

品    名：	Cystic Fibrosis PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0036-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACE

CCL2

DNAJC5

GOPC

IFRD1

IL7R

MBL2

PDZK1

S100A8

SLPI

TGFB3

TNFSF10

B

ADIPOR2

CFTR

DUSP1

GSTM1

IGFBP5

IL8

MET

PLA2G5

SCNN1B

SNAP23

TJP1

VCP

C

ADK

CLU

EDN1

HSP90AA1

IL10

ITGA2

MSRA

PPP2R4

SCNN1G

STX1A

TLR2

NR4A2

D

ADRB2

CXCL1

EDNRA

HSPA1A

IL11

ITGB2

NFKB1

PRKAA1

SERPINA1

STX8

TLR4

PTGS2

E

AHSA1

CXCL2

EPSTI1

HSPA4

IL1A

KCNE1

NFKBIA

PRKAA2

SFTPB

TCF7L1

TLR5

SLC9A3R2

F

ALOX12B

CXCR2

EZR

HSPA8

IL1A

KIT

NME1

PRKCE

SLC26A3

TCF7L2

TNF

TGFB2

G

CALR

DEFB1

FAS

HSPH1

IL1B

LCN2

NOS3

PRTN3

SLC9A3R1

TGFB1

TNFRSF11A

TNFRSF1A

H

CANX

DNAJA1

GCLC

ICAM1

IL6

MAPK1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Human）		相关基因
囊性纤维化修饰基因		ADIPOR2,ADRB2,CXCL8 ,EDNRA,GCLC,GSTM1,IFRD1,MBL2,MSRA,NOS3,SCNN1B,SCNN1G,SERPINA1,TCF7L2,TGFB1,TNF,TNFRSF1A
CTFR互动程序		AHSA1,CANX,CFTR,DNAJA1,DNAJC5,EZR,GOPC,HSP90AA1,HSPA4 ,HSPA8,NME1,PDZK1,PRKAA1,PRKAA2,PTPA,SLC26A3,SLC9A3R1,SLC9A3R2,SNAP23,STX1A,STX8,TGFB1,TJP1,VCP.
中性粒细胞趋化		CCL2 ,CXCL8,CXCR2,EDN1,EDNRA,IL1B,ITGB2
炎症反应		ACE,ADRB2,ALOX12B,CCL2,CXCL1,CXCL2 ,CXCL8 ,DEFB1,EDNRA,IL10,IL1B,IL6,ITGB2,MBL2,NFKB1,PLA2G5,PTGS2,S100A8,SERPINA1,TGFB1,TLR2,TLR4,TLR5,TNF,TNFRSF11A ,TNFRSF1A .
免疫 应答	先天免疫	CCL2 ,CLU,DEFB1,ICAM1,LCN2,MAPK1,MBL2,NFKB1,NFKBIA ,PRKCE,TGFB1,TLR2,TLR4,TLR5,TNFSF10
	获得性免疫	CLU,FAS,ICAM1,IL10,IL1B,IL7R,MBL2,TGFB1,TLR4,TNF,TNFRSF11A
未折叠蛋白反应		CALR,DNAJA1,HSP90AA1,HSPA1A,HSPA4,HSPA8,HSPH1,VCP.
离子结合和传输		ADK,KCNE1,NR4A2,SCNN1B,SCNN1G,SLC9A3R1
氧化应激		CLU,DUSP1,GCLC,IL6,LCN2,MBL2,MSRA,NOS3,PTGS2,SFTPB.
其他囊性纤维化基因		EPSTI1,IGFBP5,ITGA2,KIT,MET,PRTN3,SLPI.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.