产品介绍

GDNF家族信号传导

      胶质细胞系衍生的神经营养因子（GDNF家族）是一组结构和功能相关的多肽，参与控制神经元的存活和分化、肾脏形态发生和精原细胞的命运[1]。

GDNF家族配体包括GDNF、Neurturin（NRTN）、Artemin（ARTN）和Persephin（PSPN）。它们通过GDNF家族受体α（GFR-alpha）和具有酪氨酸激酶活性的Ret原癌基因（Ret）发出信号。已经表征了四种不同的GFR-alpha受体（GFR-alpha 1、GFR-alpha 2、GFR-alpha3、GFR-Alpha4），它们决定了GFR-alpha/RET复合物的配体特异性。GDNF与GFAlpha1结合，然后与RET形成复合物。NRTN与GFAlpha 2结合，ARTN与GFalpha3结合，PSPN通过与GFAlphar4结合激活RET。NRTN和ARTN可以与GFAlpha1弱串扰，而GDNF与GFAlpha 2弱串扰。GDNF与脂质锚定的GFR-α结合，并诱导RET同源二聚和酪氨酸自磷酸化。一旦磷酸化，活化RET的细胞内结构域中的酪氨酸残基就充当靶细胞中各种细胞内信号蛋白的高亲和力结合位点，例如衔接蛋白SHC转化蛋白（SHC）、成纤维细胞生长因子受体底物2（FRS2）、酪氨酸激酶1下游（DOK1），酪氨酸激酶4和5（IRS5（DOK4）和IRS6（DOK5））、胰岛素受体底物1和2（IRS-1和IRS-2）以及PDZ和LIM结构域7（ENIGMA）的下游。RET还可以募集磷脂酶Cγ（PLCγ）和V-src肉瘤病毒癌基因同源物（C-src）[1]。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	GDNF Signaling PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	wc-mRNA0218-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ABCG2

CDC25A

FRS2

GFRA3

IKBKB

ITGB1

MAP2K1

MAPK9

NFKB1

PSPN

RPS6KA2

TWIST1

B

AKT1

CDK2

FYN

GFRA4

IKBKE

ITGB3

MAP2K2

MET

NOTCH1

PTEN

SHC1

VEGFA

C

AKT2

CDKN1A

GAB1

GRB2

IKBKG

JAG1

MAP2K7

MMP2

NRTN

PTK2

SOS1

MAPK8

D

AKT3

CREB1

GAB2

HECW2

IL1B

JAK1

MAP3K1

MMP7

PAK1

RAF1

SRC

NCK1

E

ARTN

DAG1

GAS1

HES1

IL6

JAK2

MAPK1

MMP9

PDLIM7

REL

TERT

PROM1

F

BAD

DOK1

GDNF

HEY1

IL8

JAK3

MAPK10

MYC

PLCG1

RELA

TFF1

RPS6KA1

G

BAX

FLT1

GFRA1

HIF1A

IRS1

JUN

MAPK3

NCAM1

PRKCA

RET

TNF

TP53

H

BCL2

FOS

GFRA2

HRAS

IRS2

KIT

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.