产品介绍：

      Hippo信号是一种进化上保守的信号通路，在人类和小鼠中，该途径由MST1和MST2激酶及其辅因子Salvador和LATS1及LATS2组成。为应对高细胞密度，激活的LATS1/2磷酸化转录辅激活子YAP和TAZ，促进其细胞质定位，导致细胞凋亡并限制器官大小过度生长。当Hippo途径在低细胞密度下失活时，YAP/TAZ易位到细胞核中，与转录增强因子（TEAD/TEF）家族的转录因子结合，以促进细胞生长和增殖。YAP/TAZ还与其他转录因子或信号分子相互作用，通过Hippo途径介导的过程与其他关键信号级联的过程相互关联，例如由TGFβ和Wnt生长因子介导的那些过程。

      WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Hippo Signaling PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0071-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Actg1

Ajuba

Amot

Amotl1

Amotl2

Casp3

Ccne1

Ccne2

Cdh1

Crb1

Crb2

Crb3

B

Csnk1d

Csnk1e

Ctnnb1

Dchs1

Dchs2

Diaph2

Dvl2

Fat1

Fat2

Fat3

Fat4

Fjx1

C

Gli1

Gli2

Gpc5

Hipk2

Hmcn1

Lats1

Lats2

Limd1

Lix1l

Llgl1

Llgl2

Lpp

D

Mapk10

Meis1

Mob1a

Mob1b

Mpdz

Mpp5

Mst1

Myc

Nf2

Nphp4

Pard3

Pard6a

E

Pard6g

Poteg

Ppp2ca

Ppp2cb

Ppp2r1a

Ppp2r2d

Prkci

Prkcz

Ptpn14

Rassf2

Rassf4

Rere

F

Sav1

Scrib

Smad1

Smad2

Smad3

Stk11

Stk3

Stk4

Taok1

Taok2

Taok3

Taz

G

Tead1

Tead2

Tead3

Tjp1

Tjp2

Tp63

Tshz1

Tshz3

Wnt1

Wtip

Wwc1

Wwtr1

H

Yap1

Ywhab

Ywhae

Ywhaq

Ywhaz

Zdhhc18

Actb

Gapdh

Hprt1

Ubb

NTC

NTC

 

基因分类（rat）	相关基因
Upstream HippoSignalingRegulators	Actg1,Ajuba,Amot,Amotl1,Amotl2,Casp3,Crb1,Crb2,Crb3,Csnk1d,Csnk1e,Dchs1,Dchs2,Diaph2,Dvl2,Fat1,Fat2,Fat3,Fat4,Fjx1,Limd1,Lix1l,Llgl1,Llgl2,Lpp,Nf2,Rassf2,Rassf4,Scrib,Wtip,Wwc1,Zdhhc18.
Hippo CoreKinaseComplex	Lats2,Mob1a,Mob1b,Mst1,Sav1,Stk3,Stk4,Taz,Wwtr1,Yap1.
DownstreamMediators of Hippo Signaling	Hipk2,Mapk10 (Jnk3),Meis1,Prkci,Prkcz,Smad1,Tead1,Tead2,Tead3,Tp63,Tshz1,Tshz3,Wnt1.
Hippo Signaling Target Genes	Casp3,Ccne1,Ccne2,Myc,Ppp2ca,Ppp2cb,Ppp2r1a,Ppp2r2d,Ptpn14,Rere.
ContactInhibition	Nf2,Taz,Yap1.
Cell Polarity	Crb1,Crb2,Crb3,Dchs1,Dchs2,Fat1,Fat2,Fat3,Fat4,Gpc5,Hmcn1,Lats1,Lats2,Mpdz,Mpp5, Mst1,Nphp4,Pard3,Pard6a,Pard6g,Potef,Poteg,Scrib,Stk3,Stk4,Taok1,Taok2,Taok3,Tjp1,Tjp2.
ScaffoldingProteins	Ywhab,Ywhae,Ywhaq (14-3-3θ),Ywhaz.

Hippo信号通路图

 

 

图片来源于：https://www.kegg.jp/pathway/map04390

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.