产品介绍：

       亨廷顿疾病（HD）是一种常染色体显性遗传性神经退行性疾病，主要影响中棘纹状体神经元（MSN）。症状为舞蹈样，不自主运动，性格改变和痴呆。HD是由IT15基因中的CAG重复扩增引起的，其导致靠近HD蛋白亨廷顿蛋白（Htt）的氨基末端的长链聚谷氨酰胺（polyQ）。突变体Htt（mHtt）在细胞质和细胞核中都有作用。全长亨廷顿蛋白被细胞质中的蛋白酶切割，导致细胞质和神经炎聚集体的形成。mHtt还改变囊泡运输和再循环，引起细胞溶质和线粒体Ca2+超载，通过蛋白酶体功能障碍触发内质网应激，并损害自噬功能，增加神经元死亡易感性。含有polyQ-strech的N-末端片段易位至细胞核，在那里它们损害转录并诱导神经元死亡。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Huntington's Disease PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0074-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AKT1

C3

CREBBP

GJA1

HAP1

IGF1

NCOR1

PLCB1

RCOR1

SLC14A1

TAC1

TUBB

B

APOE

CALB1

DCTN1

GJB6

HDAC1

ITPR1

NEFL

PLOD2

REST

SLC25A4

TAF4

ZBTB16

C

AQP1

CASP3

DLG4

GNAQ

HDAC2

JNK3

NGEF

PPARGC1A

RGS4

SNAP25

TBP

PGK1

D

ARFIP2

CASP8

EEF1A2

GPX1

HIP1

KCNAB1

NRF

PPP3CA

RILP

SOD1

TGM2

RAB6A

E

ATP2B2

CD44

EGFR

GRB2

HOMER1

KCNAB2

NTRK2

PRKCB

RPH3A

SOX2

TOLLIP

SIN3A

F

BAX

CLTC

ELMO1

GRIN2A

HPCA

KCNC3

P53

PRPF40A

RXRB

SP1

TP53

SYN1

G

BBOX1

CNR1

FGF12

GRIN2B

HTT

LPL

PACSIN1

PTPN11

SGK1

SYMPK

TRAF2

TUBA

H

BDNF

CREB1

GABRD

GRM5

IFT57

MAP3K10

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（human）			相关基因
Huntingtinofactors		CLTC,CREBBP (CBP),DCTN1,DLG4 (PSD95),EGFR (ERBB1),GRB2,HAP1,HDAC2,HIP1,MAP3K10, NCOR1,PACSIN1,PRPF40A,PTPN11,RCOR1,REST,SIN3A,SP1,SYMPK,TBP,TP53 (p53).
SP1 &REST TargetGenes	SP1TargetGenes			AKT1,APOE,AQP1,ARFIP2,BDNF,C3,CASP8 (FLICE),CD44,CLTC,CREBBP (CBP),DLG4 (PSD95),FGF12, GJA1 (CX43),GJB6,GPX1,GRB2,GRIN2A,HAP1,HDAC1,HOMER1,HPCA,HTT,KCNC3,LPL,MAP3K10,PACSIN1, PRKCB,RAB6A,REST,RILP,RXRB,SGK1,SIN3A,SOD1,SOX2,SP1,SYMPK,SYN1,TGM2,TOLLIP,TP53 (p53),TUBB.
	RESTTarget Genes			BDNF,CALB1,DLG4 (PSD95),EEF1A2,ELMO1,FGF12,GABRD,GRIN2A,KCNAB2,KCNC3,NEFL,RPH3A, RXRB,SNAP25,SYN1,TOLLIP,TUBB.
CytoskeletonRegulators				AKT1,APOE,ARFIP2,CASP8 (FLICE),DCTN1,DLG4 (PSD95),ELMO1,GRIN2A,HAP1,HIP1,HOMER1 ,IFT57,ITPR1,NCOR1,NEFL,PACSIN1,SYMPK,TAC1,TUBB.
Ion Transport				AKT1,AQP1,ATP2B2,GABRD,GRIN2A,HOMER1,HTT,ITPR1,KCNAB1,KCNAB2,KCNC3,PPP3CA,SGK1.
Regulation of Synaptic Transmission				APOE,BDNF,CALB1,EGFR (ERBB1),GNAQ,GRIN2A,GRIN2B,HTT,PPP3CA,TAC1.
Postsynaptic Density (PSD)				DLG4 (PSD95),GRIN2A,HOMER1,ITPR1.
Synaptic Proteins				DLG4 (PSD95),GABRD,GRIN2A,GRIN2B,HOMER1,ITPR1,RPH3A,SNAP25,SYN1.
Neurotransmitter Receptors				CNR1,GABRD,GRIN2A,GRIN2B,GRM5,NTRK2.
ProcessesDysregulatedinHuntington's Disease	Apoptosis			AKT1,APOE,BAX,BDNF,CASP3,CASP8 (FLICE),CD44,CREB1,EEF1A2,EGFR (ERBB1),ELMO1,GJB6, GRIN2A,HIP1,HTT,IFT57,IGF1,MAP3K10,NEFL,NGEF,SGK1,SLC25A4,SOX2,TBP,TP53 (p53),TUBB,ZBTB16.
	Endocytosis			C3,CLTC,HIP1,PACSIN1.
	Oxidation / Reduction			APOE,BBOX1,EGFR (ERBB1),GPX1,KCNAB1,KCNAB2,PLOD2,PPARGC1A (PGC-1α),SOD1.
	Calcium Signaling  & Homeostasis			APOE,ATP2B2,GNAQ,GRIN2A,GRIN2B,HOMER1,ITPR1,PLCB1,PPP3CA,TAC1,TGM2.
Other Huntington's Disease Genes				PGK1,RGS4,SLC14A1.

亨廷顿疾病通路图：

图片来源于：https://www.kegg.jp/kegg-bin/show_pathway?map05016

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.