产品介绍：

      白细胞介素-6是一种炎性细胞因子，是许多STAT3激活剂之一。IL6通过其受体IL6R/IL6ST（GP130）发出信号，激活Janus激酶，进而磷酸化并激活STAT（信号转导和转录激活因子），包括STAT3.IL6/STAT3通路在生物过程中激活炎症反应，如感染和肿瘤发生。STAT3靶基因重叠与来自NFκB信号传导途径的靶标显着相关，NFκB信号传导途径是促进炎症反应的另一个关键途径。STAT3信号通常在癌发生过程中上调，特别是在肿瘤微环境内肿瘤细胞和免疫细胞的相互作用期间。这种上调涉及生物过程，例如分化和增殖以及血管生成和细胞凋亡。

      沃吉基因IL6 STAT3信号通路PCR阵列包括激活剂，下游介质和IL6/STAT3信号传导的靶基因，包括细胞因子和参与NFκB信号传导的基因等90个基因

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	IL6/STAT3 Signaling Pathway PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	wc-mRNA0075-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

A2M

CCL4

CEBPD

EGFR

IL13

IL2

IL6

JUNB

MAPK8

OSMR

SOCS3

TNFSF10

B

AKT1

CCL5

CSF1

FAS

IL15

IL21

IL6R

LIF

MET

PHF21A

SRC

TNFSF11

C

BAX

CD4

CSF2

FASLG

IL17A

IL22

IL6ST

LIFR

MTOR

PIAS3

STAT3

JAK3

D

BCL2

CD40

CSF3

HGF

IL18

IL23A

IL7

LTA

MYC

PIM1

TLR4

MAPK3

E

BCL3

CD40LG

CSF3R

IKBKB

IL18R1

IL2RA

IL8

MAP2K1

NFKB1

PROS1

TNF

OSM

F

CASP4

CD80

CXCL10

IL10

IL1A

IL3

IL9

MAPK1

NFKBIA

RAC1

TNFRSF10B

SOCS1

G

CCL2

CDC25A

CXCL12

IL11

IL1B

IL4

JAK2

MAPK14

NRP1

RELA

TNFRSF1A

TNFRSF1B

H

CCL3

CDKN1A

CXCR4

IL12A

IL1R1

IL5

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

基因分类（Human）	相关基因
STAT3激活剂	EGFR  , IL10 , IL11 , IL17A , IL21 , IL23A , IL6 .
细胞表面受体	CD4 , CD40 , CSF3R, FAS , IL18R1 , IL1R1 , IL2RA, IL6R , IL6ST, LIFR , TNFRSF10B , TNFRSF1A ,TNFRSF1B .
IL6/STAT3上游信令	AKT1 , JAK2 , JAK3 , MAP2K1 , MAPK1 , MAPK14 , MAPK3 , MAPK8 , MTOR , MYC , PIAS3 , SOCS1 , SOCS3 , SRC ,
IL6/STAT3下游信令	BAX , BCL2 , CDKN1A , HGF , MET , PIM1 , STAT3
IL6 / STAT3 信号靶基因	CCL2 , CCL5  , CEBPD , CXCL10, CXCL8, IL10 , IL11 , IL17A , IL1B , IL21 , IL6 , MYC , SOCS3
细胞因子	CCL2 , CCL3, CCL4, CCL5, CD40LG , CSF1, CSF2 , CSF3  , CXCL10, CXCL8 , FASLG, IL10 , IL11 , IL13 , IL15 , IL17A , IL18 , IL1A , IL1B , IL2 , IL21 , IL22 , IL23A , IL3 , IL4 , IL5 , IL6 , LIF , LTA, OSM , TNF , TNFSF10
NFκB 信号	NFKB1 , NFKBIA, RELA , TLR4

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.