产品介绍：

该阵列所代表的所有毒性反应途径可以是独立的或相互关联的。例如，β-氧化的抑制导致脂肪变性，线粒体能量代谢的解偶联导致细胞凋亡和坏死。影响活性氧代谢或细胞氧化还原状态的药物会导致氧化应激并诱导抗氧化反应。在长期暴露或过量DNA、细胞或组织损伤的更极端条件下，这些和其他反应性药物还直接损伤DNA或抑制其修复激活DNA损伤信号和DNA修复途径或凋亡和坏死。对蛋白质合成的干扰导致内质网应激，并激活未折叠的蛋白质反应，上调热休克蛋白和伴侣基因的表达。当药物抑制或压倒其化学修饰激活时，细胞色素P450和其他I期药物代谢酶的表达增加。当药物抑制脂肪酸和脂质代谢（β-氧化），包括脂肪变性、胆汁淤积和磷脂变性等脂质储存障碍时，会导致更严重和复杂的现象。免疫系统细胞对药物的毒性反应导致免疫毒性和免疫抑制

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Molecular Toxicology PathwayFinder PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0096-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

HUMAM

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AASS

C3

CD36

CTSB

ENO1

ESD

IDH2

IL1A

PTGS2

SYCP2

TNFRSF10B

XRCC1

B

ABCB1

C9

CPT1B

DHCR24

EP300

ESR1

IDH3A

IL1B

PTPRC

SYT1

TNFRSF1A

XRCC5

C

ACOX2

CASP1

CPT2

DLAT

EPHX1

HSF2

IDH3B

LSS

PVR

SYVN1

TPO

IL13

D

AHR

CASP3

CRAT

DNAJA3

EPX

HSP90AA1

IDH3G

LY6D

RAB25

TGFB1

TRIM10

PPARA

E

BAD

CASP7

CROT

EDEM3

ERCC1

HSP90B1

IFNA1

MSH2

RAD51

TMEM57

UGT1A1

S100A7A

F

BAK1

CASP8

CRYAA

EHHADH

ERCC2

HSPA1A

IFNG

NQO1

RDX

TNF

UGT2A1

TNFRSF10A

G

BAX

CASP9

CRYAB

EIF2AK3

ERCC3

ICAM1

IL10

NR0B2

RETN

TNFAIP8L1

XPA

XPC

H

BCL2

CAT

CS

EIF5B

ERCC5

IDH1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Human）	相关基因
细胞凋亡	AKT1,BCL2,BCL2L1,CASP8,CASP9,FASLG.
细胞坏死	CYLD,GRB2,MAG,PARP2,PVR,TXNL4B.
DNA损伤与修复	ATM,BRCA1,CDKN1A,ERCC2 ,MDM2,RAD51.
线粒体能量代谢	ARRDC3,ASB1,CYB561D1,DNAJB1,HSPA1A,HSPA1B,SLC25A25.
脂肪酸代谢（β-氧化）	ACADM,ACADVL,ACOX1,CPT1A,CPT1B,CPT2
氧化应激与抗氧化反应	AKR1C2,FHL2,GCLM,HMOX1,NCOA7,NQO1,SLC7A11.
热激反应	HSF1,HSP90B1,HSPA4,HSPA8,HSPB1 ,HSPD1.
内质网应激与未折叠蛋白反应	ADM2,ASNS,DNAJB9,HERPUD1,INHBE,TRIB3,UHRF1.
细胞色素P450s与I期药物代谢	CYP1A2,CYP2B6,CYP2C19,CYP2C9,CYP2D6.
脂肪变性	CD36,FASN,LPL,PPARA,SCD,SREBF1.
胆汁淤积	ABCB4,ABCC2 ,ABCC3,ATP8B1,PDYN,RDX,SLC51A.
磷脂质病	ASAH1,HPN,LSS,SERPINA3,SLC2A3,TAGLN,WIPI1.
免疫毒性	ADH1C,F2,HPX,LYZ,METAP2,MKI67,NR5A2,TRIM10

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.