产品介绍：

       哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号是一种高度保守的非典型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。 mTORC 与蛋白质连接形成两个多蛋白质复合物，作为两个不同蛋白质复合物 mTOR 复合物 (mTORC) 1 和 mTORC2 的核心成分。这两种不同的蛋白质复合物调节不同的细胞过程。第一个是 mTOR 复合物 1 (mTORC1)，由 mTOR、Raptor、GβL 和 DEPTOR 组成，并被雷帕霉素抑制。它是一种主要的生长调节剂，可感知并整合各种营养和环境信号，包括生长因子、能量水平、细胞压力和氨基酸。第二个复合体 mTOR complex 2 (mTORC2) 由 mTOR、Rictor、GβL、Sin1、PRR5/Protor-1 和 DEPTOR 组成。 mTORC2 通过激活 Akt 促进细胞存活，通过激活 PKCα 调节细胞骨架动力学，并通过 SGK1 磷酸化控制离子转运和生长。异常的 mTOR 信号传导涉及许多疾病状态，包括癌症、心血管疾病和糖尿病。

       沃吉基因mTOR信号PCR阵列包括了mTORC1 和 mTORC2 复合物的成分及许多 mTOR 反应的上游调节剂，和受 mTOR 复合物激活并调节的下游基因等。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	mTOR Signaling PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0095-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Akt1

Ddit4

Fkbp8

Igf1

Mapk1

Pik3ca

Ppp2r4

Prkca

Rps6

Rragb

Telo2

Vegfc

B

Akt1s1

Ddit4l

Flcn

Igfbp3

Mapk3

Pik3cb

Prkaa1

Prkcb

Rps6ka1

Rragc

Trp53

Ywhaq

C

Akt2

Deptor

Fnip1

Ikbkb

Mapkap1

Pik3cd

Prkaa2

Prkce

Rps6ka2

Rragd

Tsc1

Prkag3

D

Akt3

Eif4b

Gsk3a

Ilk

Mlst8

Pik3cg

Prkab1

Pten

Rps6ka5

Sesn1

Tsc2

Ros1

E

Cab39

Eif4e

Gsk3b

Ins2

Mtor

Pld1

Prkab2

Rheb

Rps6kb1

Sgk1

Ulk1

Rraga

F

Cab39l

Eif4ebp1

Hif1a

Insr

Myo1c

Pld2

Prkag1

Rhoa

Rps6kb2

Stk11

Ulk2

Tbp

G

Cdc42

Eif4ebp2

Hras1

Irs1

Pdpk1

Ppp2ca

Prkag2

Rictor

Rptor

Stradb

Vegfa

Vegfb

H

Chuk

Fkbp1a

Hspa4

Kptn

Pik3c3

Ppp2r2b

Actb

Gapdh

Hprt1

B2m

NTC

NTC

基因分类（Mouse）		相关基因
mTOR 复合物	mTORC1 复合物	Mlst8,Mtor,Rptor.
	mTORC2 复合物	Mapkap1 ,Mlst8,Mtor,Rictor.
mTOR上游调节基因	mTORC1正调节	Akt1,Akt2,Akt3,Hras,Igf1,Ikbkb ,Ins2,Insr,Irs1,Mapk1 ,Mapk3 ,Pdpk1,Pik3c3 ,Pik3ca , Pik3cb,Pik3cd,Pik3cg,Pld1,Pld2,Rheb,Rps6ka1,Rps6ka2,Rps6ka5,Rraga,Rragb,Rragc, Rragd,Telo2,
	mTORC1负调控	Akt1s1 ,Cab39,Cab39l,Ddit4 ,Ddit4l ,Deptor,Fkbp1a ,Fkbp8,Igfbp3,Prkaa1 ,Prkaa2, Prkab1,Prkab2,Prkag1,Prkag2,Prkag3,Pten,Stk11 ,Stradb,Trp53 ,Tsc1,Tsc2,Ywhaq .
	mTORC2正调节	Akt1,Akt2,Akt3,Mapk1 ,Mapk3 ,Pdpk1,Pik3c3 ,Pik3ca ,Pik3cb,Pik3cd,Pik3cg,Rheb, Rps6ka1,Rps6ka2,Rps6ka5.
	mTORC2负调控	Cab39,Cab39l,Ddit4 ,Ddit4l ,Deptor,Prkaa1 ,Prkaa2,Prkab1,Prkab2,Prkag1,Prkag2, Prkag3,Stk11 ,stradb,Tsc1,Tsc2.
mTOR下游效应器	mTORC1正调节	Chuk ,Eif4b,Eif4e,Hif1a,Ikbkb ,Rps6,Rps6kb1,Rps6kb2,Trp53 ,Vegfa,Vegfb,Vegfc.
	mTORC1负调控	Eif4ebp1,Eif4ebp2,Ppp2ca,Ppp2r2b,Ptpa,Trp53 ,Ulk1,Ulk2.
	mTORC2正调控	Akt1,Cdc42,Gsk3b,Hspa4 ,Ilk,Myo1c,Prkca,Prkcb,Prkce,Prkcg,Rhoa,Rps6kb1,Sgk1.
mTOR信号调节的细胞过程	氨基酸反应	Pik3c3 ,Rraga,Rragb,Rragc,Rragd,Kptn
	血管生成	Chuk ,Ddit4 ,Ddit4l ,Hif1a,Ikbkb ,Vegfa,Vegfb,Vegfc.
	自噬	Pik3c3 ,Ulk1,Ulk2,Flcn,Sesn1
	细胞骨架组织	Cdc42,Prkca,Prkcb,Prkce,Prkcg,Rhoa.
	生长因子反应	Hras,Igf1,Igfbp3,Mapk1 ,Mapk3 ,Rps6ka1,Rps6ka2,Rps6ka5.
	能量应激	Prkaa1 ,Prkaa2,Prkab1,Prkab2,Prkag1,Prkag2,Prkag3,Fnip1
	胰岛素信号	Akt1,Akt2,Akt3,Ins2,Insr,Irs1,Pdpk1,Pik3ca ,Pik3cb,Pik3cd,Pik3cg,Trp53 .
	脂质代谢	Pld1,Pld2.
	翻译	Eif4b,Eif4e,Eif4ebp1,Eif4ebp2,Ppp2ca,Ppp2r2b,Ptpa,Rps6,Rps6ka1,Rps6ka2, Rps6ka5,Rps6kb1,Rps6kb2,Tbp

mTOR信号通路图：

图片来源于：https://www.genome.jp/pathway/map04150

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.