产品介绍：

       NO（一氧化氮）是一种重要的信号分子，具有血管舒张和抗炎作用，在降低高血压和心血管疾病方面具有积极作用。同时，NO也与健康风险有关，如致癌风险增加和婴儿缺氧。有人认为，NO也可以提高线粒体效率。NO可以通过经典的精氨酸NO合酶途径由L-精氨酸形成，也可以通过脱氧珠蛋白直接由膳食亚硝酸盐形成。

       沃吉基因一氧化氮信号通路PCR阵列包含参与一氧化氮生物合成、超氧化物代谢的基因和参与氧化应激反应的基因。还包括由NO诱导或抑制的基因，这些基因可以作为细胞系统中NO通路激活的指标。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Nitric Oxide Signaling Pathway PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0108-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

AKT1

CCS

DUOX1

GCHFR

GPX5

INS

MTL5

NOS3

PNKP

PRKCA

SOD1

TXNRD2

B

ALOX12

CDKN1A

DUOX2

GLA

GPX6

JUN

MYB

NOX5

PPP3CA

PRNP

SOD2

VEGFA

C

APOE

CNGB1

DUSP1

GLRX2

GRIN2D

KRT1

NCF1

NQO1

PRDX2

RNF7

SOD3

NOS2

D

ARG2

CNGB3

DYNLL1

GPR156

GSS

LPO

NCF2

NUDT1

PRDX5

SCARA3

SRXN1

PIK3CD

E

ATOX1

CSDE1

EGFR

GPX1

IL10

MBL2

NME5

OXR1

PRDX6

SCRT2

TBP

PRKAR1B

F

CAMK1

CYGB

EPX

GPX2

IL2

MPO

NOS1

PIK3CA

PREX1

SEPP1

TPO

SIRT2

G

CAT

DDAH2

FOXM1

GPX3

IL6

MSRA

NOS1AP

PIK3CB

PRG3

SGK2

TROAP

TTN

H

CCNA1

DLG4

GCH1

GPX4

IL8

MT3

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

 

基因分类（Human）		相关基因
一氧化氮生物合成	氧化还原酶	NOS1,NOS2，NOS3 ,NQO1
	一氧化氮生物合成调节	DYNLL1,GLA,IL10,INS,NOS1AP
	其他一氧化氮生物合成基因	AKT1,ARG2,DDAH2,DYNLL1,EGFR,GCH1,GCHFR
一氧化氮诱导		CDKN1A ,CXCL8,JUN,VEGFA
抑制一氧化氮		CCNA1,MYB,TROAP
一氧化氮信号传导		CAMK1,DLG4,GRIN2D,NOS1,PPP3CA,PRKAR1B,PRKCA
超氧化物代谢	超氧物释放	ALOX12,DUOX1,DUOX2,NOX5,PRG3
	氧化还原酶	ALOX12,DUOX1,DUOX2,NOS2 ,NOX5,SOD1,SOD2,SOD3
	过氧化物酶	DUOX1,DUOX2
	其他超氧化物代谢基因	CCS,NCF1,NCF2,PREX1
氧化应激	抗凋亡	MPO,NME5,PRDX2,RNF7
	抗氧化剂	APOE,MT3,SOD1,SOD3,SRXN1
	谷胱甘肽过氧化物酶	GPX1,GPX2,GPX3,GPX4,GPX5,GPX6
	氧化还原酶	CAT,EPX,GPX1,GPX2,GPX3,GPX4,GPX5,GPX6,LPO,MPO,MSRA,PRDX2,PRDX6,SOD1,SOD2, SRXN1,TPO,TXNRD2
	过氧化物酶	CSDE1,CYGB,EPX,GPR156,LPO,MPO,PRDX2,PRDX5,PRDX6,TPO,TTN
	转录调控	CSDE1,FOXM1,GLRX2,SCRT2,SIRT2,SOD2.
其他氧化应激反应基因		ATOX1,DUSP1,GSS,KRT1,MBL2,NUDT1,OXR1,PNKP,PRNP,SCARA3,SGK2

一氧化氮信号通路图：

图片来源于：https://www.wikipathways.org/index.php/Pathway:WP1995

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.