产品介绍：

       Notch信号通路是一种进化上保守的细胞间信号传导机制，对于动物的正常胚胎发育至关重要。Notch蛋白（脊椎动物中的Notch1-Notch4）是单程受体，由膜结合配体的Delta和Jagged/Serrate家族激活。它们以裂解的形式运输到质膜，但在其他方面是完整的多肽。与配体的相互作用导致两个额外的蛋白水解裂解，从质膜上释放Notch胞内结构域（NICD）。NICD易位到细胞核，与DNA结合蛋白CSL形成复合物，取代CSL中的组蛋白去乙酰化酶（HDAc）-辅阻遏物（CoR）复合物。激活复合物的成分，如MAML1和组蛋白乙酰转移酶（HATs），被招募到NICD-CSL复合物，导致Notch靶基因的转录激活。

       沃吉基因Notch信号通路PCR阵列包含Notch信号 基因，Notch靶基因与Notch信号相关的其他信号通路基因（wnt，hedgehog）等关键90个基因。

       WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Notch Signaling Pathway PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0107-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ADA

CCNE1

DLL4

FZD3

HEYL

JAG2

MMP7

NOTCH2NL

PPARG

SERPINA3

STIL

WNT11

B

ADAM10

CD44

DTX1

FZD4

HOXB4

KRT1

NCOR2

NOTCH3

PSEN1

SH2D1A

SUFU

ZIC2

C

ADAM17

CDKN1A

EP300

GLI1

HR

LFNG

NCSTN

NOTCH4

PSEN2

SHH

TBP

NOTCH2

D

AES

CFLAR

ERBB2

GSK3B

ID1

LMO2

NEURL

NR4A2

RBPJL

SLC6A12

TFF1

POFUT1

E

AFAP1L2

CHUK

FIGF

HDAC1

IFNG

LOR

NFKB1

NRARP

RFNG

SMO

TLE1

SEL1L

F

AXIN1

CTNNB1

FOS

HES1

IL17B

LRP5

NFKB2

NUMB

RUNX1

SNAI2

TNFSF10

STAT6

G

CBL

DLL1

FOSL1

HEY1

IL2RA

MAML1

NOTCH1

PAX5

SCGB1A1

SNW1

UBD

WISP1

H

CCND1

DLL3

FZD2

HEY2

JAG1

MAML2

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

基因分类（human）	相关基因
Notch信号	ADAM10,ADAM17 ,DLL1 ,DLL3,DLL4,DTX1,EP300,HDAC1,JAG1,JAG2,LFNG,MAML1,MAML2,NCOR2, NCSTN,NEURL,NOTCH1,NOTCH2,NOTCH2NL,NOTCH3,NOTCH4,NUMB,PSEN1,PSEN2,RBPJL,RFNG,SNW1
Notch靶基因	CDKN1A ,CCND1,CD44,CFLAR ,CHUK ,DTX1,ERBB2 ,FOS,FOSL1 ,HES1,HEY1,HEY2,HEYL,ID1,IFNG, IL2RA ,JAG1,KRT1,LFNG,LOR,NFKB1,NFKB2,NOTCH1,PPARG,STAT6.
其他Notch信号基因	AXIN1,AES ,CBL,CCNE1,CTNNB1,FIGF,GLI1,HOXB4,HR,IL17B,JAG2,LMO2,LRP5,MMP7,NOTCH2,NR4A2, PAX5,POFUT1,RUNX1 ,SEL1L,SH2D1A,SHH,TBP,TLE1,UBD.
与Notch信号交叉基因	GLI1,AES ,AXIN1,CTNNB1,GSK3B,LRP5,SHH,SMO,STIL,SUFU,TLE1,TLE1,WISP1,WNT11,ZIC2.
途径特征基因	ADA,AFAP1L2,DTX1,HEY2,HEYL,NRARP,SCGB1A1,SERPINA3,SLC6A12,SNAI2,TFF1 ,TNFSF10 ,UBD.

Notch Signaling Pathway通路图:

 

图片来源于：https://www.wikipathways.org/index.php/Pathway:WP268#nogo2

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.