产品介绍

      吞噬作用是先天免疫反应的核心组成部分，是特定细胞类型识别和吞噬外来细胞外物质的过程。虽然低等生物主要使用吞噬作用来获取营养物质，但在高等真核生物中，能够介导吞噬作用的受体几乎仅在巨噬细胞，嗜中性粒细胞和单核细胞中表达，赋予这些细胞免疫缺陷特性。这个过程非常复杂：许多受体刺激颗粒内化，介导内化的细胞骨架元素因受体系统和被内化的微生物的性质而不同，并且结果已经演变成各种关键生物现象背后的复杂过程。吞噬作用作为先天免疫防御的机制已成为微生物先天免疫相互作用的经典模型。先天免疫细胞的吞噬反应由微生物接触刺激的复杂信号传导网络的激活来定义。吞噬细胞能够通过其表面上不同的受体家族使微生物内化。这些受体不仅负责颗粒的粘附，还负责触发细胞内信号传导途径，最终导致成功的吞噬作用。吞噬细胞与微生物的接触伴随着细胞内信号和许多信号分子的触发，这些信号分子触发细胞过程，例如细胞骨架重排，膜运输的改变，微生物杀伤机制的激活，促炎和抗炎细胞因子和趋化因子的产生，细胞凋亡的激活，并产生有效抗原呈递给适应性免疫系统所需的分子。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Phagocytosis of Microbes PCR Array plate
种    属：	Mouse
货    号：	WC-MRNA0194-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Mouse

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACTA1

DIRAS3

ITGA1

ITGA9

ITGB3

MSR1

PIK3R1

PLCB4

PRKCA

RHOA

TLR1

TLR8

B

ACTA2

FCER1A

ITGA2

ITGAE

ITGB4

PIK3C2A

PIK3R2

PLCD1

PRKCB

RHOB

TLR10

TLR9

C

ACTG1

FCER1G

ITGA2B

ITGAL

ITGB5

PIK3C2B

PIK3R3

PLCD3

PRKCD

RHOC

TLR2

PLCB3

D

ACTG2

FCER2

ITGA3

ITGAM

ITGB6

PIK3C2G

PIK3R4

PLCD4

PRKCE

RHOD

TLR3

PLCZ1

E

C3

FCGR1A

ITGA4

ITGAV

ITGB7

PIK3C3

PIK3R5

PLCE1

PRKCZ

RHOG

TLR4

RAC3

F

CDC42

FCGR2A

ITGA5

ITGAX

ITGB8

PIK3CA

PLCB1

PLCG1

RAC1

RHOH

TLR5

RND3

G

CLEC7A

FCGR3A

ITGA6

ITGB1

MARCO

PIK3CB

PLCB2

PLCG2

RAC2

RND2

TLR6

TLR7

H

CR1

FN1

ITGA7

ITGB2

MRC2

PIK3CD

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.