产品介绍：

       有丝分裂原活化蛋白激酶（MAPK）级联是所有真核生物中进化上保守的信号模块，用于将细胞外信号转导到细胞核或细胞质，以进行适当的细胞反应，包括细胞分裂、分化、程序性细胞死亡和对各种应力的适应。在植物中，不同的生物和非生物应激刺激，如病原体感染、伤害、低温、干旱、渗透冲击、高盐度和活性氧物种，会触发几个级联反应。MAPK通路在激素和发育信号传导等过程中也发挥着关键作用。由不同受体启动的多种功能途径通常共享相同的激酶成分，同时保持其信号特异性。与动物和真菌相比，所有已报道的植物MAPK基因都属于细胞外信号调节激酶（ERK）亚家族。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Plant mapk signal pathway PCR Array plate
种    属：	Arabidopsis
货    号：	WC-MRNA0289-A
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Arabidopsis

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

YDA

SUMM2

RBOHD

PR1

NP1

MPK3

MKK5

MAPKKK17

ETR2

EPF2

CAT1

ABI2

B

XRN4

SPCH

RBOHB

PP2CA

NDPK3

MPK2

MKK4

HMA5

ETR1

EPF1

CAP

ABI1

C

WRKY33

SNRK2.1

RBOHA

PDF1.2

NDPK2

MPK14

MKK3

HCHIB

ERS2

EIN4

CAM4

UBC

D

WRKY29

RTH

RBOH_F

PAD3

NDPK1

MPK10

MKK2

HAI1

ERS1

EIL3

BAK1

ACT2

E

WRKY25

RTE1

RAN1

PAA2

MYC2

MPK1

MEKK1

HAB2

ERL2

EBF2

ATMPK8

ACT8

F

WRKY22

RHD2

PYR1

PAA1

MPK7

MKS1

MEK1

HAB1

ERL1

EBF1

AHG1

TUB2

G

VSP2

RCAR3

PYL1

OST1

MPK6

MKP2

MAPKKK9

FRK1

ERF1

CTR1

AGC

NTC

H

VIP1

RCAR1

PRB1

NP2

MPK4

MKK9

MAPKKK18

FLS2

ER

CP1

ACS6

NTC

植物MAPK信号通路图：

图片来源于：https://www.genome.jp/kegg-bin/show_pathway?map04016

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.