产品介绍：

在几乎所有哺乳动物细胞类型的表面上发现的单个初级纤毛是具有9+0微管形成的非运动感觉细胞器。关键纤毛蛋白的突变最近与多种疾病有关，例如多囊肾病（PKD）和Bardet-Biedl综合征（BBS），统称为纤毛病。病理突变发生在纤毛形态发生或通过鞭毛内运输（IFT）维持所必需的基因中，破坏了初级纤毛功能。这些发现为增加初级纤毛的科学兴趣和研究提供了必要的生物学意义。最近的研究表明，初级纤毛调节细胞周期，使其在癌发生中具有潜在作用。这些细胞器还与多种信号通路协调，例如刺猬，WNT和mTOR，尽管广泛的研究尚未解释它们与许多疾病表型的联系。该阵列包含对纤毛功能中心的信号传导途径重要的基因，以及对纤毛形态发生和维持重要的基因。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

          产品内容

品    名：	Primary Cilia PCR Array plate
种    属：	RAT
货    号：	WC-MRNA0127-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

RAT

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Adcy3

Axin2

Cdk5rap2

Fuz

Htr6

Igf1

Kif3b

Mos

Pik3ca

Rock2

Tmem67

Wwtr1

B

Adcy7

Bbs1

Cdkn1a

Fzd1

Htr7

Ihh

Kras

Mtor

Pkd1

Rpgrip1l

Tp53

Ywhaq

C

Ahi1

Bbs2

CEP41

Gli1

Ift172

Ins2

Map2k1

NEK1

Pkd2

S6K1

Tsc1

Mks1

D

Akt1

Bbs4

Dvl1

Gli2

Ift20

Invs

Map2k2

Nek8

Prkca

Shh

Tsc2

Pdgfra

E

Alms1

Bbs7

Dync2li1

Gli3

Ift57

Iqcb1

MAP4

Nphp1

Ptch1

Smo

Ttc8

Rhoa

F

Arl13b

Btrc

Fjx1

Glis2

Ift74

Irs1

Mapk1

NRK2P

Ptpn5

Sstr3

Vangl2

Tbp

G

Arl6

Ccnd1

FOP

Gsk3b

Ift80

Itgb1

Mkks

Ofd1

Rab23

Sufu

Vegfa

Wnt9b

H

Avpr2

Cdc42

Fos

Hnf1b

Ift88

Kif3a

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）		相关基因
在非活动性纤毛疾病中发生突变		Ahi1,Alms1,Arl13b,Arl6,Bbs1,Bbs2,Bbs4,Bbs7,Glis2,Hnf1b,Invs,Iqcb1,Mkks,Mks1,Nek8,Nphp1,Pkd1,Pkd2, Rpgrip1l,Tmem67,Ttc8.
鞭毛内运输（IFT）		Dync2li1,Ift172,Ift20,Ift57,Ift74,Ift80,Ift88,Kif3a,Kif3b
纤毛形态发生		Alms1,Arl6,Bbs1,Bbs2,Bbs4,Bbs7,Ift172,Ift88,Mkks,Ofd1,Rpgrip1l,Vangl2,Wwtr1.
信号转导	Hedgehog 信号	Btrc,Fuz,Gli1,Gli2,Gli3,Gsk3b,Ihh,Ptch1,Rab23,Shh,Smo,Sufu.
	cAMP信号	Adcy3,Adcy7,Avpr2,Htr6,Htr7,Pkd2,Sstr3.
	mTOR 信号	Akt1,Cdc42,Gsk3b,Igf1,Ins2,Irs1,Mapk1,Mtor,Pik3ca,Prkca,Rhoa,Tp53,Tsc1,Tsc2,Vegfa,Ywhaq
	平面细胞极化	(PCP)Dvl1,Fjx1,Fuz,Fzd1,Rhoa,Rock2,Vangl2,Wnt9b
	WNT 信号	Axin2,Invs.
PDGFRA/整合素信号传导		Itgb1,Pdgfra.Fos,Kras,Map2k1,Map2k2,Mapk1,Mos,Prkca,Ptpn5.
细胞周期		Akt1,Bbs4,Ccnd1,Cdk5rap2,Cdkn1a,Igf1,Ins2,Map2k1,Pkd1,Pkd2,Tp53

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.