产品介绍：

多能干细胞（PSC）是具有无限自我更新能力的基本细胞，有可能产生三个生发层的所有细胞类型。迄今已知的PSC类型包括胚胎干细胞（ES）和诱导多能干细胞（iPS）。ES细胞来源于囊胚期胚胎的内细胞团（ICM）。iPS细胞是通过使用定义的重编程因子Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc（也称为山中因子）将体细胞重编程回到多能状态而产生的。包括ES细胞和iPS细胞的PSC根据其形态、基因表达谱和外部信号依赖性分为两组。

 WCGENE®PCRArrayPlate操作简单。只需要将cDNA与qPCRmix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Stem Cell Signaling PCR Array plate
种    属：	HUMAN
货    号：	WC-MRNA0137-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

ACVR1

ACVR1B

ACVR1C

ACVR2A

ACVR2B

ACVRL1

AMHR2

BCL9

BCL9L

BMPR1A

BMPR1B

BMPR2

B

CDX2

CREBBP

CTNNB1

E2F5

ENG

EP300

FGF2

FGF4

FGFR1

FGFR2

FGFR3

FGFR4

C

FOSL1

FZD1

FZD2

FZD3

FZD4

FZD5

FZD6

FZD7

FZD8

FZD9

GLI1

GLI2

D

GLI3

HES1

IL6ST

LEF1

LIFR

LRP5

LRP6

LTBP1

LTBP2

LTBP3

LTBP4

NCSTN

E

NFAT5

NFATC1

NFATC2

NFATC3

NFATC4

NOTCH1

NOTCH2

NOTCH3

NOTCH4

PSEN1

PSEN2

PSENEN

F

PTCH1

PTCHD2

PYGO2

RBL1

RBL2

RBPJL

RGMA

RUNX2

SMAD1

SMAD2

SMAD3

SMAD4

G

SMAD6

SMAD7

SMAD9

SMO

SP1

SPOP

STAT3

SUFU

TBP

TCF7

TCF7L1

TCF7L2

H

TGFBR1

TGFBR2

TGFBR3

TGFBRAP1

VANGL2

ZEB2

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

基因分类（Human）		相关基因
多能维持途径	细胞表面受体	IL6ST,LIFR
	转录因子	STAT3
成纤维细胞生长因子（FGF）信号	成纤维细胞生长因子受体	FGFR1,FGFR2,FGFR3,FGFR4
	转录因子	CDX2
Hedgehog 信号	受体和共受体	PTCHD2，PTCH1,SMO
	转录因子 &辅因子	GLI1,GLI2,GLI3,SUFU
Notch 信号	受体和共受体	NCSTN,NOTCH1,NOTCH2,NOTCH3,NOTCH4,PSEN1,PSEN2,PSENEN
	转录因子	RBPJL
TGFβ / BMP 信号	受体和共受体	ACVR1,ACVR1B,ACVR1C,ACVR2A,ACVR2B,ACVRL1 ,AMHR2,BMPR1A ,BMPR1B,BMPR2,ENG ,LTBP1,LTBP2,LTBP3,LTBP4,RGMA,TGFBR1,TGFBR2,TGFBR3,TGFBRAP1
	转录因子 &辅因子	CREBBP,E2F5,EP300,RBL1,RBL2,SMAD1,SMAD2 ,SMAD3,SMAD4,SMAD6,SMAD7,SMAD9,SP1,ZEB2
WNT 信号	卷曲家族成员和其他WNT受体	FZD1,FZD2,FZD3,FZD4,FZD5,FZD6,FZD7,FZD8,FZD9,LRP5,LRP6,VANGL2
	转录因子 &辅因子	BCL9,BCL9L,CTNNB1,LEF1,NFAT5,NFATC1,NFATC2,NFATC3,NFATC4 ,PYGO2,TCF7,TCF7L1,TCF7L2

干细胞信号通路图：

图片来源：https://www.kegg.jp/pathway/map04550

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.