产品介绍：

      在发育过程中，一些关键的转录因子（NANOG、POU5F1和SOX2）驱动胚胎干细胞的维持。这些基因激活或抑制这个阵列所代表的其他关键转录因子，这些转录因子是发育和分化所必需的，形成一个转录调控网络。例如，胚胎干细胞维持需要POU5F1（OCT4），而滋养层发育需要CDX2。这两个基因相互压制，形成一个调控网络，要么延迟发育，要么让它按信号进行。了解这些调控环路对于破译发育转录网络和最终阐明分化机制至关重要。该阵列包括干细胞维持所需的关键转录因子，以及参与发育过程并受其调节的转录因子和辅助因子。

     WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Stem Cell Transcription Factors PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0136-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Cdx2

Dlx1

Dlx2

Dnmt3b

Egr3

Ep300

Esr1

Ezh2

Fos

Fosl1

Foxa1

Foxa2

B

Foxi2

Foxn1

Foxp1

Foxp3

Gata6

Gbx2

Hand1

Hnf4a

Hoxa1

Hoxa2

Hoxa9

Hoxb1

C

Hoxb13

Hoxb3

Hoxb5

Hoxb8

Hoxc10

Hoxc12

Hoxc4

Hoxc5

Hoxc6

Hoxc9

Hoxd1

Hoxd10

D

Hoxd4

Htr7

Irx3

Irx4

Isl1

Jun

Klf2

Klf4

Klk10

Lif

Lin28b

Lmx1b

E

Msx2

Myc

Nanog

Neurod1

Nfatc1

Nkx2-2

Notch2

Nr2f2

Olig2

Pax1

Pax2

Pax6

F

Pax9

Pcna

Pitx2

Pitx3

Pou4f1

Pou4f2

Pparg

Rb1

Runx1

Runx2

Smad2

Sox14

G

Sox17

Sox2

Sox6

Sox9

Sp1

Stat1

Stat3

Tbp

Tbx5

Tcf7l2

Tert

Vdr

H

Wrn

Wt1

Xpc

Zfpm2

Zic1

Zic2

Actb

Gapdh

Hprt1

Ubb

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关基因
体外干细胞维护	Cdx2,Lif,Nanog,Sox2,Tcf7l2.
胎盘发育	Cdx2,Hand1,Lif,Pparg,Sp1,Vdr.
诱导多能干细胞和胚胎干细胞	Nanog,Sox2,Stat3.
轴线/对称性/分割	Cdx2,Dlx1,Dlx2,Ep300,Foxa2,Foxp1,Hoxa1,Hoxa2,Hoxa7,Hoxb3,Hoxc10,Hoxc4,Hoxc5,Hoxc6,Hoxd10,Hoxd4, Irx3,Irx4,Lmx1b,Neurod1,Notch2,Nr2f2,Pax1,Pitx2,Smad2,Tbx5,Tdgf1,Zic1
胚胎发育	Cdx2,Dlx1,Dlx2,Foxa2,Foxp1,Gata1,Gata6,Gbx2,Hand1,Hoxa2,Hoxa7,Hoxb3,Hoxc10,Hoxc4,Hoxc5,Hoxc6,Hoxd10,Hoxd4 ,Klf2,Klf4,Lmx1b,Msx2,Nanog,Neurod1,Notch2,Pax1,Smad2,Sox17,Sox2,Sp1,Tbx5,Tcf7l2,Tdgf1,Zfpm2,Zic1,Zic2.
外胚层、内胚层和中胚层的形成和分化	Foxa2,Foxn1,Gata6,Hand1,Hoxb13,Isl1,Klf4,Pax9,Runx2,Smad2,Sox9.
器官形态的形成	Cdx2,Dlx1,Dlx2,,Gbx2,Hand1,Hoxa1,Hoxa2,Hoxb13,Hoxb3,Hoxc4,Hoxd10,Hoxd4,Irx3,Isl1,Jun,Klf4,Lif,Msx2,Myc,Neurod1, Notch2,Nr2f2,Pax1,Pax2,Pax6,Pitx2,Pitx3,Pparg,Runx1,Smad2,Sox2,Sox9,Sp1,Stat3,Tbx5,Tcf7l2,Tdgf1,Vdr,Wt1,Zfpm2,Zic1.
血管生成	Cdx2,Foxi2,Gbx2,Hand1,Jun,Nr2f2,Runx1 ,Sox17,Tcf7l2,Wt1.
神经生成	Dlx1,Dlx2,Dnmt3b,Egr3,Ezh2,Fos,Foxa1,Foxa2,Foxp3,Gbx2,Hoxa1,Hoxa2,Hoxc10,Hoxd10,Irx3,Isl1,Lif,Lmx1b,Neurod1,Nkx2-2,Nr2f2,Olig2,Pax6,Pitx3,Pou4f1,Pou4f2,Pparg,Sox14,Sox2,Stat3,Zic2
造血功能	Rb1,Runx1,Sox6,Sp1,Stat1.
成骨作用	Esr1,Gata1,Hoxa2,Sox2,Sp1.
其他干细胞转录因子	Fosl1,Htr7,Klk10,Pcna,Tert,Xpc

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.