产品介绍：

   (T helper cells，TH)是一种T细胞(白细胞的一种)，它的表面有抗原接受器，可以辨识抗原呈献细胞的MHC Class II 分子呈献的抗原片段。一旦受到抗原刺激，TH细胞就增殖和分化成作用性TH细胞(effector TH)和记忆TH(memory TH)细胞。活化TH细胞分泌细胞因子、蛋白质或缩氨酸用来调控其它的免疫细胞;最通常是白介素(Interleukin)，这可以使得B细胞分化成浆细胞。

WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	T Helper Cell Differentiation PCR Array plate
种    属：	RAT
货    号：	WC-MRNA0144-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

RAT

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Asb2

Ccr5

Fasl

Havcr2

Ikzf2

Il17re

Il21

Irf8

Nr4a1

Rorc

STAT5A

Zbtb7b

B

Cacna1f

Ccr6

Faslg

Hopx

Il12b

Il18

Il2ra

Jak1

Nr4a3

Runx1

Stat6

Zeb1

C

Ccl11

CCR7

Fosl1

Hoxa10

Il12rb2

Il18r1

Il4

Lrrc32

Perp

Runx3

Tnfrsf9

Irf4

D

Ccl4

CD8A

Foxp3

Hoxa3

Il13

Il18rap

Il4ra

Maf

Pkd2

Socs1

Tnfsf11

Nfatc2ip

E

Ccl5

CD8B

Gata3

Icos

Il13ra1

Il1r1

Il5

Myb

Pou2f2

Socs5

Tox

Rora

F

Ccl7

Cebpb

Gata4

Id2

IL15

Il1r2

Il9

Nfatc1

Pparg

Stat1

Tp53inp1

Stat4

G

Ccr3

Chd7

Gfi1

Ifng

IL15RA

Il1rl1

Irf1

Nfatc2

Rel

STAT3

Trp53inp1

Uts2

H

Ccr4

Csf2

Gpr44

Igsf6

Il17a

Il2

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关基因
细胞因子和受体	Ccl11,Ccl4 ,Ccl5,Ccl7,Ccr3,Ccr4,Ccr5,Ccr6,Csf2,Il12b,Il12rb2,Il13,Il13ra1,Il17a,Il17re,Il18,Il18r1,Il18rap,Il1r1,Il1r2,Il1rl1,Il2,Il21,Il23a,Il27,Il2ra,Il4,Il4r,Il5,Il9,Tnf
辅助T细胞1亚型标记	Ccr5,Csf2,Havcr2,Igsf6,Il12b,Il18,Irf1,Socs1,Socs5,Tnf
辅助性T细胞2亚型标记	Ccl11,Ccl5,Ccl7,Ccr3,Ccr4,Cebpb,Gfi1,Icos,Il13ra1,Il4r,Jak1,Nfatc2,Nfatc2ip
转录因子	Cebpb,Fosl1,Foxp3,Gata3,Gata4,Hoxa11,Id2,Irf4,Irf8,Maf,Nfatc2,Nfatc2ip,Nr4a1,Nr4a3,Pou2f2,Rel,Rora,Rorc, Runx1,Runx3,Stat4,Stat6,Zbtb7b,Zeb1
表观遗传调控基因	Th1细胞Faslg,Ifng,Il12rb2,Il18r1,Il18rap.Th2细胞Asb2,Gata3,Il13,Il1rl1,Il4,Il5,Pparg. Th17 细胞Il17a,Il17re,Il1r1,Il21,Rora,Rorc.
诱导性和自然调节性T（iTreg和nTreg）细胞	Ccl4,Ccr6,Fosl1 ,Foxp3,Ikzf2,Il9,Irf4,Irf8,Nr4a1,Nr4a3,Pou2f2,Rel,Tnfsf11,Tox
常规与调节性T细胞	Cacna1f,Chd7,Foxp3,Gata4,Hopx,Hoxa11,Id2,Ikzf2,Il1r2,Il2ra,Perp,Pkd2,Tnfrsf9,Tp53inp1,Uts2,Zeb1

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.