产品介绍：

       端粒是六核苷酸重复的重复DNA区域，在DNA复制过程中保护染色体末端不受损伤。端粒酶（TERT）是一种逆转录酶，与RNA模板和辅因子形成复合物，以延长端粒。庇护蛋白复合物然后结合端粒DNA的3'单链末端，保护其免受DNA损伤反应。这一过程的抑制会导致端粒缩短和过早衰老相关疾病，而端粒不受控制的延长会促进癌变。端粒的研究通常使用更简单的模型生物，如酵母，这意味着许多机制细节尚未在哺乳动物系统中被发现或证实。该阵列包含参与端粒维持的基因，以及包含端粒酶和庇护蛋白复合物及其调节因子的基因。该阵列还包括最近描述的端粒调控基因，如SLX4复合物，以及其他与端粒相关但功能不明的基因。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Telomeres & Telomerase PCR Array plate
种    属：	MOUSE
货    号：	wc-mRNA0142-M
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

 基因列表

MOUSE

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Abl1

Chek1

Ercc1

Hsp90aa1

Mre11a

Obfc1

Pot1a

Rad17

Rtel1

Ssb

Tgfb1

Xrcc5

B

Acd

Chek2

Ercc4

Hsp90ab1

Msh2

Parp1

Pparg

Rad50

Sart1

Sun1

Tinf2

Xrcc6

C

Akt1

Dclre1b

Esf1

Hsp90b1

Msh3

Pax8

Ppp2r1a

Rap1a

Sirt2

Tbp

Tnks

Ptges3

D

Atm

Dclre1c

Gar1

Hspa1l

Mus81

Pif1

Ppp2r1b

Rapgef1

Sirt6

Tep1

Tnks2

Rif1

E

Atp5c1

Dkc1

Hat1

Igf1

Myc

Pik3ca

Prkca

Rassf1

Slx4

Terf1

Tpp1

Sp1

F

Bcl2

Egf

Hnrnpa1

Kras

Nbn

Pik3cb

Prkcb

Rb1

Smad3

Terf2

Trp53

Tert

G

Blm

Eif5b

Hnrnpa2b1

Krit1

Nhp2

Pinx1

Prkdc

Rfc1

Smg6

Terf2ip

Trp53bp1

Wrap53

H

Cdk2

Eme1

Hnrnpd

Men1

Nop10

Plk1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Mouse）	相关基因
端粒维护	Acd,Blm,Dclre1c,Dkc1,Ercc1,Ercc4,Hspa1l,Mre11a,Myc,Nbn,Parp1,Pif1,Pot1a,Prkdc,Ptges3,Rad50,Rfc1,Rtel1,Smg6, Tep1,Terf1,Terf2,Terf2ip,Tert,Tinf2,Tnks,Tnks2,Xrcc5,Xrcc6.
端粒相关复合物	Acd,Pot1a,Rap1a,Terf1,Terf2,Tinf2.Dkc1,Gar1,Nhp2,Nop10,Tert,Wrap53.SLX4,Eme1,Ercc1,Ercc4,Msh2,Msh3,Mus81, Plk1,Slx4,Terf2,Terf2ip.
端粒长度的调节	Rtel1,Tep1,Terf1,Terf2ip,Tnks.Dclre1b,Krit1,Rapgef1,Rassf1,Tpp1.
端粒酶调节	Abl1,Akt1,Atp5c1,Bcl2,Egf,Eif5b,Esf1,Igf1,Kras,Men1,Myc,Pax8,Pinx1,Pparg,Ppp2r1a,Ppp2r1b,Prkca,Prkcb,Rb1,Sart1, Smad3,Sp1,Ssb,Tgfb1,Trp53
其他端粒相关基因	Atm,Cdk2,Chek1,Chek2 ,Hat1,Hnrnpa2b1,Hnrnpd,Hsp90aa1,Obfc1,Rad17,Rif1,Sirt2,Sirt6,Sun1,Trp53bp1.

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.