产品介绍：

        Toll样受体（TLR）是一类在先天免疫系统中起关键作用的蛋白质。它们是通常在前哨细胞如巨噬细胞和树突细胞中表达的单跨膜非催化受体，其识别源自微生物的结构保守分子。一旦这些微生物破坏了皮肤或肠道粘膜等物理屏障，它们就会被TLR识别，从而激活免疫细胞反应。TLR包括TLR1，TLR2，TLR3，TLR4，TLR5，TLR6，TLR7，TLR8，TLR9，TLR10，TLR11，TLR12和TLR13。

       TLR信号传导分为两种不同的信号传导途径，MyD88依赖性和TRIF依赖性途径。MyD88依赖性反应发生在TLR受体的二聚化上，并且除了TLR3之外的每个TLR都使用它。其主要作用是激活NFκB和丝裂原活化蛋白激酶。受体中发生的配体结合和构象变化募集TIR家族成员衔接蛋白MyD88。然后MyD88招募IRAK4，IRAK1和IRAK2。然后IRAK激酶磷酸化并激活蛋白TRAF6，后者又使蛋白TAK1及其自身多聚泛素化，以促进与IKK-β的结合。在结合时，TAK1磷酸化IKK-β，然后磷酸化IκB导致其降解并允许NFκB扩散到细胞核中并激活转录并随后诱导炎性细胞因子。TLR3和TLR4都利用TRIF依赖性途径，其分别由dsRNA和LPS触发。对于TLR3，dsRNA导致受体激活，募集衔接子TRIF。TRIF激活激酶TBK1和RIPK1，其在信号传导途径中产生分支。TRIF/TBK1信号复合物磷酸化IRF3，使其易位至细胞核并产生I型干扰素。同时，RIPK1的激活以与MyD88依赖性途径相同的方式引起TAK1和NFκB转录的多泛素化和活化。

       WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Toll-Like Receptor Signaling Pathway PCR Array plate
种    属：	Human
货    号：	WC-MRNA0148-H
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Human

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

BTK

CD86

ELK1

IFNB1

IL2

IRF3

MAP3K7

NFKBIB

REL

TICAM1

TLR5

TRAF6

B

CASP8

CHUK

FADD

IFNG

IL4

JUN

MAP4K4

NFKBIL1

RELA

TICAM2

TLR6

UBE2N

C

CCL11

CLEC4E

FOS

IKBKB

IL6

LTA

MAPK8

NFRKB

RIPK2

TIRAP

TLR7

NFKBIA

D

CCL2

CSF2

HMGB1

IL10

IL8

LY86

MAPK8IP3

NR2C2

SARM1

TLR1

TLR8

PTGS2

E

CCL20

CSF3

HRAS

IL11

IRAK1

LY96

MYD88

PELI1

SIGIRR

TLR10

TLR9

TBP

F

CD14

CXCL10

HSPA1A

IL12A

IRAK2

MAP2K3

NFKB1

PPARA

TAB1

TLR2

TNF

TLR4

G

CD180

ECSIT

HSPD1

IL1A

IRAK4

MAP2K4

NFKB2

PRKRA

TBK1

TLR3

TNFRSF1A

TOLLIP

H

CD80

EIF2AK2

IFNA1

IL1B

IRF1

MAP3K1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18S

NTC

NTC

基因分类（Human）	相关基因
Toll样受体	Tlr1、Tlr2、Tlr3、Tlr4、Tlr5、Tlr6、Tlr7、Tlr8、Tlr9。
病原体特异性反应	Cd14、Fos、Hmgb1、HRAS、Hspa1a、Il10、Il12a、Il1b、Il6、Irak1、Jun、Lta、Ly86、Ly96、Nfkbia、Ptgs2、Rela、Ripk2、Ticam1、Tlr2、Tlr4、Tlr6、Tnfrsf1a。病毒反应EIF2AK2、Ifnb1、Ifng、Il12a、Il6、Irf3、Rela、Tbk1、Ticam1、Tlr3、Tlr7、Tlr8、Tnf。真菌/寄生虫反应CLEC4E、Hspa1a、Tirap、Tlr2。
Toll样受体（TLR）信号	Toll样受体（TLR）信号转导的负调控。TICAM1（TRIF）-依赖（MYD88独立）信号 IRF3、Map3k7、Nr2c2、Peli1、Tbk1、TICAM1、Ticam2、Tlr3、Tlr4、Traf6。MYD88相关信号IRAK1、Irak2、Map3k7、Myd88、Nr2c2、Tirap、Tlr1、Tlr2、Tlr4、Tlr5、Tlr6、Tlr7、Tlr8、Tlr9、Traf6
Toll样受体下游信号	NFκB信号传导Btk、Casp8、Chuk、Fadd、Ikbkb、Il10、Il1b、Irak1、Irak2、Irf3、Ly96、Map3k1、Map3k7、Nfkb1、Nfkb2、Nfkbia、Nfkbib、Nfkbil1、Nfrkb、Ppara、Rel、Rela、Tnf、Tnfrsf1a、Ube2n、Tnf。JNK/p38信号ELK1、Fos、Il1b、Jun、Map2k3、Map2k4、Map3k1、Map3k7、Mapk8、Mapk8ip3、Tnf。JAK/STAT信号ccl2、Csf2、Ifng、Il12a、Il2、Il6
干扰素调节因子（IRF）信号传导	CXCL10、Ifnb1、Ifng、Irf1、Irf3、Tbk1。 细胞因子信号CCL2、Csf3、Il1a、Il1b、Il6、Irak1、Irak2、Rela、Tnf、Tnfrsf1a
适应性免疫调节	Cd80、Cd86、Hspd1、Ifng、Il10、Il12a、Il1b、Il2、Map3k7、Traf6。
Toll样受体相互作用蛋白质和适配器	Btk、Cd14、Hmgb1、HRAS、Hspa1a、Hspd1、Ly86、Ly96、Mapk8ip3、Myd88、Peli1、Ripk2、Ticam1、Ticam2、Tirap、Tollip。
Toll样受体信号的下游效应器	Casp8、Eif2ak2、Fadd、Irak1、Irak2、Map3k7、Nr2c2、Ppara、Traf6、Ube2n、

Toll样受体信号通路图：

 

图片来源于：https://www.kegg.jp/pathway/map=map04620&keyword=Inflammatory%20Cytokines%20

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.