图2.（A）qRT-PCR显示，在Bel-7404和SK-Hep1细胞中，miR-125a-5p在用模拟物转染后被上调，而在抑制剂转染后被下调。（B和C）使用CCK8和集落形成测定法评估转染的Bel-7404和SK-Hep1细胞的细胞增殖能力。（D）在Bel-7404和SK-Hep1细胞中转染后，使用WB分析p53，Bax，Bcl-2和活化的caspase-3的表达。（E）转染Bel-7404和SK-Hep1细胞后，检测到caspase底物的免疫荧光染色。

3.3 PTPN1和MAP3K11是HCC中miR-125a-5p的直接靶标

使用三个靶点预测数据库预测miR-125a-5p的靶标，确定了131个共同要素（图3A）。结果表明，``JUN激酶活性的激活''是miR-125a-5p的生物学功能，而PTPN1，MAP3K9，MAP3K10和MAP3K11是miRNA的潜在靶标（图3B和3C）。在本研究的其余部分中，重点放在PTPN1和MAP3K11上。

图3.（A）使用三个靶点预测数据库预测miR-125a-5p的靶标；确定了131个共同要素。（B和C）在Cytoscape中用ClueGO和CluePedia分析了这131个靶基因。（D和F）miR-125a-5p及其在PTPN1和MAP3K11的3'-UTR中的假定结合序列。（E和G）miR-125a-5p的过表达被抑制，而敲低则增加了野生型（WT）的荧光素酶活性，但没有突变（MT），PTPN1或MAP3K11 3'-UTR。（H）通过Western印迹评估转染的Bel-7404和SK-Hep1细胞中PTPN1和MAP3K11蛋白的表达。

3.4 PTPN1和MAP3K11上调与肝癌中miR-125a-5p表达负相关

“ JUN激酶活性的激活”与数据库预测的131个常见元件相关的生物学功能之一，这意味着JNK MAPK信号通路可能对miR-125a-5p的生物学功能至关重要。

图4.（A和B）在Starbase的TCGA中PTPN1和MAP3K11被上调。（C和D）PTEP1和MAP3K11