使用PCRarray分析多不饱和脂肪酸对转运蛋白表达的影响
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作者:wcgene
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发布时间: 2020-03-13
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B）或EPA处理的（C）样品的散点图。AA和EPA显着增加SLC7A11表达。 
图2.AA和EPA对转运蛋白表达影响的PCRarray分析。（A）BeWo细胞（对照样品）的Ct值的分布。（B和C）BeWo细胞用100μM AA或EPA处理24小时。散点图描绘了对照中每种基因相对于测试样品AA（B）或EPA（C）的表达水平。 3.PUFA对xCT / SLC7A11表达和功能的改变 随后，通过RT-qPCR验证BeWo细胞中PUFA的SLC7A11 mRNA的变化。通过AA和EPA诱导SLC7A11的表达水平分别达到对照值的414％和636％（图3A）。此外，用DHA处理还使SLC7A11增加至BeWo细胞中对照值的294％。 SLC7A11编码胱氨酸/谷氨酸转运蛋白xCT蛋白。蛋白质印迹分析显示PUFA（AA，EPA和DHA）分别使xCT蛋白水平增加至对照的209％，222％和219％（图3B）。xCT / SLC7A11 Na + - 独立地介导胱氨酸对细胞的摄取与谷氨酸的外排相结合。在无Na +条件下通过[14 C] -胱氨酸转运活性评估xCT / SLC7A11的功能。根据xCT蛋白质水平的诱导，AA，EPA和DHA分别将对BeWo细胞的[14 C] -胱氨酸摄取显着增加至对照的180％，209％和250％（图3C）。 
图3.多不饱和脂肪酸对xCT / SLC7A11表达和功能的影响。（A）用100μM的AA，EPA或DHA处理BeWo细胞24小时。处理后，通过RT-qPCR研究xCT / SLC7A11的表达。（B）用PUFA处理的BeWo细胞的Western印迹。（C）用PUFA处理后，研究了[14 C] - 胱氨酸的摄取活性。将BeWo细胞与含有[14 C] - 胱氨酸的无Na +转运缓冲液一起温育10分钟。 4.敲低NRF2 / NFE2L2不影响PUFA对xCT / SLC7A11的改变 使用siRNA研究了NRF2参与BeFA细胞中PUFA对xCT / SLC7A11的改变。靶向NRF2 / NFE2L2的siRNA处理72小时显着降低NRF2mRNA表达至阴性对照水平的约20％（图4A）。血红素加氧酶-1（HO-1 / HMOX1）是NRF2的另一个靶基因，在阴性对照
