产品介绍：

      上皮-间充质转化（EMT）是一个过程，在此过程中，细胞失去其上皮特征，并获得间充质特性，如运动性增加。在结直肠癌（CRC）中，EMT与侵袭或转移表型相关。在EMT过程中，肿瘤细胞经历紧密连接溶解、顶端-基底极性的破坏和细胞骨架结构的重组，使细胞形成侵袭性表型。在癌细胞中，EMT受到来自肿瘤微环境的细胞外刺激（包括生长因子和炎性细胞因子）以及肿瘤内物理应激（如缺氧）的异常调节。因此，EMT编程允许肿瘤细胞适应人类肿瘤微环境的不断变化，从而成功转移。

      WCGENE® PCR Array Plate操作简单。只需要将cDNA与qPCR mix混匀，然后加入每个孔里，上机检测，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

产品内容

品    名：	Epithelial to Mesenchymal Transition (EMT) PCR Array plate
种    属：	Rat
货    号：	WC-MRNA0053-R
规    格：	96孔板
品    牌：	Wcgene® biotech
产    品：	96孔引物预置板，封板膜，说明书
储    存：	-20℃
有效期：	六个月
生产日期：	见外包装
使用限制：	本产品仅供科研使用，不应用于诊断、预防和治疗疾病。

基因列表

Rat

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

A

Ahnak

Col1a2

Erbb3

Fzd7

Itga5

Mitf

Ocln

Rgs2

Sparc

Tgfb1

Tspan13

Zeb1

B

Akt1

Col3a1

Esr1

Gemin2

Itgav

Mmp2

Pdgfrb

Serpine1

Spp1

Tgfb2

Twist1

Zeb2

C

Bmp7

Col5a2

F11r

Gng11

Itgb1

Mmp3

Plek2

SIP1

Stat3

Tgfb3

Vcan

Rac1

D

Cald1

Ctgf

Fgfbp1

Gsc

Jag1

Mmp9

Ppp3r1

Smad2

Steap1

THBS1

Vim

Sox10

E

Camk2n1

Ctnnb1

Fgfr2

Gsk3b

Krt14

Msn

PPPDE2

Snai1

TCF3

THBS2

Vps13a

Tfpi2

F

Cav2

Dsc2

Fkbp1a

Igfbp4

Krt19

MST1R

Ptk2

Snai2

Tcf4

Timp1

Wnt11

Tmem132a

G

Cdh1

Dsp

Fn1

Il1rn

Krt7

Nodal

Ptp4a1

Snai3

Tcf7l1

Tmeff1

Wnt5a

Wnt5b

H

Cdh2

Egfr

Foxc2

Ilk

Map1b

Notch1

ACTB

GAPDH

HPRT1

18s

NTC

NTC

基因分类（Rat）	相关基因
上皮向间充质转化过程中上调	Ahnak、Cald1、Camk2n1、Cdh2、Col1a2、Col3a1、Col5a2、Fn1、Foxc2、Gng11、Gsc、Igfbp4、 Itga5、Itgav、Mmp2、Mmp3、Mmp9、Msn、Serpine1、Snai1，Snai2、Snai3、Sox10、Sparc、Steap1、 Tcf4、Timp1、Tmeff1、Tmem132a、Twist1、Vcan、Vim、Vps13a、Wnt5a、Wnt5b
上皮向间充质转化过程中下调	Cav2、Cdh1、Dsp、Fgfbp1、Il1rn、Krt19、Mitf、Ocln、Rgs2、Spp1、Tfpi2、Tspan13
差异化与发展 细胞形态发生	Akt1、Bmp7、Col3a1、Col5a2、Ctnnb1、Dsp、Erbb3、F11r、Fgfr2、Foxc2、Fzd7、Gsc、Jag1、Krt14、Map1b、Mitf、Nodal、Notch1、Ppp3r1、Ptp4a1、Smad2、Snai1、Snai2、Sox10、Tgfb2、Tgfb3、Tmeff1、Twist1、Vcan、Wnt11、Wnt5a、Wnt5b。Ctnnb1、Foxc2、Jag1、Rac1、Smad2、Snai1、Sox10、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Twist1、Wnt11、Wnt5a。
细胞生长与增殖	Akt1、Bmp7、Cav2、Ctnnb1、Egfr、Erbb3、Fgfbp1、Foxc2、Igfbp4、Ilk、Jag1、Nodal、Pdgfrb、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3、Timp1、Vcan、Zeb1。
细胞迁移和运动	Cald1、Cav2、Egfr、Fn1、Itgb1、Jag1、Msn、Nodal、Pdgfrb、Rac1、Stat3、Tgfb1、Vim
细胞骨架调节因子	Cav2、Krt7、Plek2、Rac1、Vim。
细胞外基质和细胞粘附分子	Bmp7、Ccn2、Cdh1、Cdh2、Col1a2、Col3a1、Col5a2、Ctnnb1、Dsc2、Egfr、Erbb3、F11r、Fgfr2、Fn1、Foxc2、Ilk、Itga5、Itgav、Itgb1、Mmp2、Mmp3、Mmp9、Ptk2、Rac1、Serpine1、Spp1、Tgfb1、Tgfb2、Timp1、Vcan。
雌激素受体信号	Esr1、Krt19、Tgfb3
G蛋白偶联受体信号传导	Fzd7、Gng11、Rac1、Rgs2。
整合素介导的信号传导	Col3a1、Ilk、Itga5、Itgav、Itgb1、Ptk2。
槽口信号	FoxC2、Jag1、Notch1。
受体酪氨酸激酶信号	EGFR、Erbb3、Fgfr2、Pdgfrb、Rgs2、Sparc。
TGFβ/BMP信号	BMP7、Col3a1、Fkbp1a、Smad2、Tgfb1、Tgfb2、Tgfb3
WNT信号	Fzd7、Gsk3b、Wnt11、Wnt5a、Wnt5b
转录因子	Ctnnb1、Esr1、Foxc2、Gemin2、Gsc、Mitf、Notch1、Smad2、Snai2、Snai3、Sox10、Stat3、Tcf4、 Tcf7l1、Twist1、Zeb1、Zeb2

检测原理

实时定量荧光PCR即通过实时检测 PCR 每一个循环扩增产物相对应的荧光信号，来实现对起始模板进行定量及定性的分析，本实验采取荧光染料法，在 PCR 反应体系中，加入荧光染料，荧光染料特异性地掺入 DNA 双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与 PCR 产物的增加完全同步。

产品介绍

PCR Array也被称作基因功能分类芯片或PCR阵列，它以96孔板或者384孔为载体，将目的基因引物固定在孔里，可同时定量、定性检测多个基因，具有高灵敏性和高特异性，是分析信号通路或某生物学功能相关基因表达状态的首选工具。

WCGENE® PCR ARRAY Plate含90个目的基因和4个内参基因，只需要将cDNA与qPCR MIX混匀，然后加入每个孔里，即可通过分析qPCR结果找到样品中差异表达的基因。具有重复性高，灵敏性强，操作便捷等特点。为实验研究者节省了预实验、引物验证、文献选择基因等繁琐的过程，可以直接了解不同信号通路或疾病中关键基因的差异情况。

流程图

操作步骤

1. 将样品提取RNA，并逆转成cDNA，样品要求如下（建议范围）：

RNA：	无明显降解，A260/A280比值应为1.8-2.0
cDNA：	严格按照所用试剂盒说明书操作
cDNA原液预实验内参范围：	ACTB或GAPDH的CT值：细胞15左右；组织18左右

*推荐使用Wcgene® mRNA cDNA kit合成cDNA

2. 板子使用前离心，2000r离心20 秒，离心结束后将封板膜小心撕掉。

3. 按照表a配制cDNA和mix混合液920μl，将配好的混合液混匀后按每个孔9μl量加板，加完后用透明封板膜封板，2000r离心20 秒，上机检测。

表a. cDNA和mix混合液配方表

组成成分	96孔 （搭配96孔板,每孔9 μl）
Wcgene® mRNA qPCR mix （2×）	510 μl
cDNA sample	100 μl
无RNA酶ddH2O	290 μl
ROX Reference Dye（50×）	20 μl
总体积	920 μl

4. 反应体系设置10μl，程序设置如表b所示

表b. PCR反应条件（WCGENE ® mRNA qPCR mix试剂盒为例）

循环		温度	时间
预变性	1	95℃	30 sec
变性	40	95℃	5 sec
退火延伸	40	60℃	30 sec
熔解曲线分析

 

5. 上机开始Real Time PCR反应

6. 结果导出，数据分析

芯片与适用的Real Time PCR仪（本品仅适用于订单所写机器型号）

Plate format	Instrument provider	qPCR instrument model
A (96 well)	Roche Applied Science	LC480
	Bio-rad	CFX96
B (96 well)	Applied Biosystems	7500， 7900HT， ViiA 7
C (96 well)	Applied Biosystems	7500 Fast System, 7900HT Fast System, StepOnePlus, ViiA 7 Fast System

参考文献

Zhu J J, Liu Y F, Zhang Y P, et al. VAMP3 and SNAP23 mediate the disturbed flow-induced endothelial microRNA secretion and smooth muscle hyperplasia[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2017, 114(31): 8271-8276.

Siqing Yue, Jie Yu, Yuan Kong, Haofeng Chen, Manfei Mao, Chenyang Ji, Shuai Shao, Jianqiang Zhu, Jinping Gu, Meirong Zhao,Metabolomic modulations of HepG2 cells exposed to bisphenol analogues,Environment International,Volume 129,2019,Pages 59-67,ISSN 0160-4120,

Zhao Y, Wang J, Xu C, et al. HEG1 indicates poor prognosis and promotes hepatocellular carcinoma invasion, metastasis, and EMT by activating Wnt/β-catenin signaling[J]. Clinical Science, 2019, 133(14): 1645-1662.