文章信息
1.研究背景
miR-125a-5p在肝细胞癌(HCC)和其他癌症中是一种肿瘤抑制因子,但在HCC肿瘤发生过程中其作用机理仍然未知。
2.方法
2.1 来自HCC患者的8对肝癌组织和邻近正常组织使用miRNA芯片(Shanghai Wcgene Biotech, Shanghai,上海启因生物)比较miRNA的表达情况
2.2 细胞转染,对转染后的细胞进行qRT-PCR分析,CCK8和菌落形成试验,Western blot分析,以及免疫荧光分析。
2.3 利用数据库预测miR-125a-5p的靶基因
2.4 建立小鼠肿瘤模型
3.结果
3.1 miR-125a-5p在HCC组织和细胞系中下调
使用微阵列比较八对HCC组织和邻近正常组织中的miRNA表达。结果表明,与邻近的正常组织相比,HCC组织中的miR-125a-5p表达降低。此外,qRT-PCR表明miR-125a-5p在HCC细胞系(Bel-7404,SK-Hep1,Bel-7404和MHCC-97H)中的表达低于正常肝细胞系(L02)。
图1. (A)在八对匹配的HCC组织和相邻正常组织中差异表达的miRNA的热图。(B)qRT-PCR表明,与邻近的正常组织相比,HCC组织中的miR-125a-5p表达下调。(C)与Starbase中TCGA中相邻的正常组织相比,HCC肿瘤组织中的miR-125a-5p表达下调。(D)qRT-PCR表明,miR-125a-5p在HCC细胞系(Bel-7404,SK-Hep1,Bel-7404和MHCC-97H)中的表达低于正常肝细胞系(L02)。(E)Kaplan-Meier曲线表明,HCC患者的总体生存率与miR-125a-5p表达水平无关。
3.2 miR-125a-5p在体外抑制HCC细胞增殖并诱导其凋亡
分别通过用miR-125a-5p模拟物和抑制剂转染,在Bel-7404和SK-Hep1细胞中过表达和敲低miR-125a-5p。并通过qPCRC,CCK8和菌落形成分析,Western印迹和免疫荧光实验表明,miR-125a-5p在体外抑制HCC细胞的增殖并诱导其凋亡。