高通量PCR芯片揭示了Epstein-Barr病毒转录的意外模式,用于病毒mRNA的绝对定量
来源:
|
作者:wcgene
|
发布时间: 2020-03-13
|
97 次浏览
|
分享到:
5天,LMP1水平达到最大值,EBER1 RNA变得可检测到。感染后10天,除EBER外,转录谱与已建立的LCL相似(图4A和B)。即使在Wp活性在稍后的时间点下降后,Wp启动的转录物的数量仍然与Cp转录物的数量相当。
与潜在基因转录相反,在初次感染期间存在非常少的裂解周期转录物(图4A,5)。值得注意的例外是BNLF2A和BNLF2B,其与LMP1同时检测到,并且与LMP1等同(图4A和5)。在其他可检测的裂解周期转录物中,最丰富的是BZLF1,其在感染后5天达到峰值(图4A)。然而,该BZLF1信号至少比真正裂解循环期间观察到的水平低100倍(参见图2和4A),这意味着小于0.5%的细胞表达高水平的BZLF1或BZLF1在整个表达水平均很低。
图4.在正常B细胞感染期间诱导的EBV转录本的绝对定量。(A)从外周血分离的原代B细胞在M.O.I.感染。(B)平行测定3个新建立的LCL(感染后2-3个月)。
图5.热图比较裂解周期诱导期间和原代B细胞感染期间的EBV转录本水平。数据表示为相对于PGK转录本的EBV转录本的数目。
感染性病毒体内的EBV mRNA
通过密度梯度离心纯化的病毒制剂中存在的RNA转录物和EBV DNA基因组的数量(表1)。研究结果表明,传入的病毒可以提供无关紧要的病毒转录本。
表1.在成熟感染性病毒体中检测到EBV mRNA
不同形式潜伏期的EBV病毒转录本定量
接下来,我们比较了8个Lat I BL系列,5个Wp限制BL系列,5个Lat III BL系列和10个Lat III LCL系列中EBV转录本的绝对水平。
图6.(A)从3条显示不同形式潜伏期的具有代表性的BL线和从Oku BL分离出的EBV株感染正常B细胞所建立的LCL中获得芯片数据。(B)从8个Lat I BL线,5个Wp BL线,5个Lat III BL线和10个LCL获得的数据的热图。
BL活组织检查样本中EBV转录本的定量
图7.(A)从5个BL活组织检查样品中获得的芯片数据。(B)从所有7个BL活组织检查获得的芯片数据的热图汇总。
结果总结
首先,在感染正常B细胞期间,