文章标题：

Unexpected patterns of Epstein–Barr virus transcription revealed by a High throughput PCR array for absolute quantification of viral mRNA

Rosemary J Tierney， Claire D Shannon-Lowe， Leah Fitzsimmons， Andrew I Bell，Martin Rowe

杂志：Virology

DOI：https://doi.org/10.1016/j.virol.2014.10.030

研究背景：

通过RT-QPCR芯片平台的绝对定量检测不同潜伏期和溶解感染状态的Epstein-Barr病毒转录本，并获得新发现。

方法

对培养的细胞进行诱导和转染Epstein-Barr病毒，通过PCR芯片绝对定量方法，检验不同时间点的mRNA变化。

结果

利用48:48Fluidigm芯片RT-QPCR验证EBV转录本

从10个独立实验获得的相同6个代表性基因的Ct值的比较证明，Fluidigm Biomark HD系统的结果在4至5个对数范围内是可重复的（图1D）。

图1.（A）AQ质粒的设计。（B）热图总结了10倍稀释的AQ质粒与对照质粒的45个PCR测定的信号。（C）5份EBV转录本和PGK细胞转录本的典型标准曲线，包括潜伏转录本Wp；立即早期（IE）裂解转录本，BZLF1；早期（E）裂解转录本，BALF1；晚期（L）裂解转录本，BILF1；非编码转录本，EBER1；和细胞转录本，PGK1。（D）10个独立预扩增的AQ-质粒稀释液独立重复的结果证明，Fluidigm Biomark HD系统的结果在4至5个对数范围内是可重复的

诱导裂解周期后EBV转录本的绝对定量

在使用质粒对照验证了高通量绝对定量方法之后，接下来使用EBV分析组来表征从潜伏期转变为病毒复制后的EBV转录组。细胞诱导裂解循环，并且在0.5至72小时的间隔收获细胞用于RT-QPCR分析。

未经处理的Akata-BL细胞（0小时）的潜在基因转录水平非常低。诱导后