Wnt信号是最显著的富集途径。信号通路报告芯片也确认Wnt信号传导受HEG1调节最显着。总之，公共数据库分析和实验结果表明，HEG1可以激活Wnt信号及其在肝癌中的下游效应子。

图4.HEG1主要激活HCC中的Wnt信号

（A）TCGA数据库中371位HCC患者的KEGG通路富集分析。使用DAVID进行KEGG通路分析。HEG1的差异相关基因在51个途径中富集。其中26条途径显着丰富。（B）Cignal Finder癌症10通路报告基因阵列，显示受到HEG1表达干扰的细胞中的信号传导变化。（C）通过Western印迹检测Wnt信号传导途径的关键成员及其下游效应子。

3.5 HEG 1通过β-catenin和apc激活wnt信号

    使用Wnt /β-catenin信号通路PCR芯片研究HEG1如何激活HCC中的Wnt信号。

HEG1与APC负相关，与β-catenin正相关。Co-IP结果显示，HEG1可以与β-catenin相互作用，但不能与APC相互作用。CHX追踪分析HEG1对β-catenin稳定性的影响显示，HEG1的延长了β-catenin的半衰期。蛋白质印迹显示HEG1高表达增加了总β-catenin和细胞增生性β-catenin，减少了P-β-catenin并增加了核β-catenin，最终导致Wnt信号及其下游效应的激活。

图5. （A）通过Wnt /β-catenin信号传导相关基因qPCR阵列的人类靶标检测到具有HEG1表达干扰的HCC细胞的基因表达。 HEG1表达可正向调节CTNNB1（红）的表达，负向调节APC（蓝）的表达。（B）通过蛋白质印迹检测HEG1，APC和β-catenin的蛋白表达水平。（C）在HCC连续切片中HEG1，APC和β-catenin表达的代表性IHC图像，在训练组和验证组中通过Spearman相关检验分析了它们的表达相关性。（D）Co-IP分析HCC细胞中HEG1，APC和β-catenin之间的直接结合。（E）通过CHX追逐测定法测定具有HEG1表达干扰的细胞中HEG1和β-连环蛋白的蛋白半衰期。（F）通过蛋白质印迹法检测总β-catenin，细胞质β-catenin，核β-连环蛋白和P-β-catenin